Typy interakcie medzi vírusom a bunkou. Produktívny typ interakcie medzi vírusom a bunkou

Interakcia viriónu so živou bunkou sa uskutočňuje v niekoľkých fázach.

IN počiatočné (prípravné) obdobie virión je pripojený k bunke, preniká do nej, po čom je proteínový obal viriónu zničený, čím sa uvoľňuje nukleová kyselina.

Prichádza latentné (latentné) obdobie vírusová infekcia, počas ktorej nie je možné žiadnymi metódami zistiť prítomnosť vírusových častíc v infikovanej bunke - rodičovský virión akoby zmizne. Počas tohto obdobia vírusová nukleová kyselina, ktorá vstúpila do bunky, organizuje syntézu vírusových zložiek potomstva, pričom na tento účel využíva enzymatický systém hostiteľa. Reprodukčný cyklus končí vytvorením dcérskych viriónov a ich uvoľnením z bunky ( koncové obdobie ).

Jednoduchšie usporiadané baktérie nie sú schopné zachytiť častice z prostredia sami. Preto majú bakteriofágy špeciálne adaptácie na prekonanie hustej bakteriálnej steny. Koniec chvosta obsahuje špeciálny enzým, ktorý rozpúšťa bakteriálnu membránu. Potom sa mikroskopické „svaly“ chvosta stiahnu a nukleová kyselina fága sa „vstrekne“ do bunky, ako keby bola injikovaná injekčnou striekačkou.

Výsledkom je, že proteínový obal fága zostáva na povrchu bunky a do bunky sa dostáva iba nukleová kyselina.

Nukleové kyseliny vírusov vykonávajú program na vytvorenie nového vírusového potomstva v bunke. Dokázali to pôvodné experimenty. Vírusy bolo možné rozdeliť na ich zložky – proteíny a nukleové kyseliny. Ukázalo sa, že k infekcii buniek a reprodukcii vírusov došlo až po pridaní vírusovej nukleovej kyseliny do buniek. Inými slovami, samotné nukleové kyseliny vírusov môžu spôsobiť množenie vírusov, to znamená, že majú infekčné vlastnosti. V inom experimente boli dva vírusy rozdelené na ich základné zložky a potom „oblečené“: nukleová kyselina jedného vírusu bola „oblečená“ do obalu druhého. Výsledné hybridy boli infikované citlivé bunky. Zistilo sa, že oba „zamaskované“ vírusy sú schopné rozmnožovania a výsledné potomstvo je vždy podobné vírusu, ktorého nukleová kyselina obsahovala hybrid.

Vírusová nukleová kyselina, ktorá vstúpila do bunky, riadi všetky procesy reprodukcie vírusu. Najprv spôsobí, že bunka syntetizuje takzvané skoré proteíny, ktoré potláčajú vlastný metabolizmus bunky a zabezpečujú syntézu nukleových kyselín dcérskych častíc. K ich tvorbe dochádza v dôsledku samokopírovania materskej nukleovej kyseliny. Genetická informácia vložená do nukleovej kyseliny vírusu určuje zloženie proteínov, z ktorých sú postavené dcérske častice takzvaných neskorých proteínov. Vo vírusoch obsahujúcich DNA sa táto informácia realizuje pre bunku obvyklým spôsobom: na DNA sa syntetizuje messenger RNA (transkripcia), ktorá riadi následnú biosyntézu proteínov (transláciu). V nukleovej kyseline mnohých vírusov obsahujúcich RNA sú kombinované genetické aj informačné funkcie: RNA sa podieľa na replikácii aj translácii (v reprodukcii nukleových kyselín a vírusového proteínu). V mnohých vírusoch konštrukcia proteínových obalov a vnútorného obsahu prebieha oddelene. Bunka „získava“ jednotlivé časti, ktoré sa potom spájajú a vytvárajú vírusové častice. Keď sa v infikovanej bunke nahromadí dostatočný počet „prázdnych miest“ pre budúce vírusové častice, ako keby sa začalo skladanie častí (kompozícia). Tento proces sa zvyčajne vyskytuje v blízkosti bunkovej membrány, ktorá sa ho zúčastňuje. Vírusové častice často obsahujú látky

charakteristické pre bunku, v ktorej sa vírus replikuje. Napríklad pri víruse chrípky je konečným štádiom tvorby vírusovej častice jej obalenie vrstvou bunkovej membrány. To znamená, že bunka vírus nielen „kŕmi“ a „zavlažuje“, ale ho aj „oblečie“ pri rozlúčke. Posledná fáza interakcie medzi vírusom a bunkou je spravidla krátka. Výsledné plnohodnotné vírusové častice rýchlo vystupujú do vonkajšieho prostredia. Vznik potomstva v bakteriofágoch prebieha veľmi zvláštnym spôsobom. Zvyčajne je sprevádzané rozpúšťaním (lýzou) bakteriálnych buniek pôsobením špeciálneho enzýmu, ktorý sa hromadí v bunke paralelne s reprodukciou fága a vedie k jej zničeniu a smrti. Pod mikroskopom môžete jasne vidieť, ako sa to deje. Niekedy baktérie akoby vybuchli, inokedy sa v baktérii vytvorí otvor (v strede alebo na jednom z koncov), cez ktorý vyteká jej obsah. Z jednej mŕtvej baktérie sa môže uvoľniť až niekoľko stoviek nových fágových častíc. Proces reprodukcie fágov pokračuje, kým nie sú zničené všetky baktérie citlivé na tento fág. Pre vírus pravých kiahní, poliomyelitídu a encefalitídu je tiež charakteristické rýchle uvoľnenie stoviek a niekedy aj tisícok dcérskych viriónov do prostredia. Iné ľudské a zvieracie vírusy (herpes vírus, mumps, reovírusy) opúšťajú bunky, keď dozrievajú. Tieto vírusy majú čas prejsť niekoľkými cyklami rozmnožovania pred okamihom bunkovej smrti, čím postupne vyčerpávajú syntetické zdroje buniek a spôsobujú ich zničenie. V niektorých prípadoch sa V. môže hromadiť vo vnútri buniek, pričom vytvára kryštálové akumulácie (V. besnoty, adenovírusy atď.), ktoré sa nazývajú inklúzne telieska.

Pri chrípke, besnote, psitakóze, kiahňach sa takéto telá nachádzajú v cytoplazme buniek, s jarno-letnou encefalitídou, žltou zimnicou, herpesom a poliomyelitídou - v jadre; pri niektorých infekciách sa inklúzne telieska našli v jadre aj v cytoplazme. Nedávne štúdie ukázali, že v drvivej väčšine prípadov sú tieto inklúzie vírusové kolónie a ich tvorba je pravidelná v určitom štádiu rozmnožovania infekčných agens. Vysoká špecifickosť intracelulárnych inklúzií pri vírusových ochoreniach umožňuje použiť túto vlastnosť na diagnostiku. Napríklad cytoplazmatické inklúzie nachádzajúce sa v nervových bunkách mozgu (takzvané Negriho telieska) sú hlavným dôkazom besnoty a špecifické okrúhle alebo oválne útvary (takzvané Guarnieriho telieska) nachádzajúce sa v epitelových bunkách poukazujú na pravé kiahne. Inklúzie sú opísané aj pre encefalitídu, detskú paralýzu chrbtice, slintačku a krívačku a iné choroby. Veľmi zvláštne inklúzie, ktoré majú kryštalickú formu, tvoria rastlinné vírusy. To znamená, že k reprodukcii vírusov dochádza zvláštnym, neporovnateľným spôsobom. Najprv vírusové častice prenikajú do buniek a uvoľňujú sa vírusové nukleové kyseliny. Potom sa pripravia podrobnosti o budúcich vírusových časticiach. Reprodukcia končí zostavením nových vírusových častíc a ich uvoľnením do prostredia. Strata ktoréhokoľvek z týchto štádií vedie k narušeniu normálneho cyklu a má za následok buď úplné potlačenie reprodukcie V. alebo výskyt defektných potomkov.

Hlavné fázy interakcie vírusu s hostiteľskou bunkou.

1. Adsorpcia - spúšťací mechanizmus spojený s interakciou špecifických receptorov vírusu a hostiteľa (pre vírus chrípky - hemaglutinín, pre vírus ľudskej imunodeficiencie - glykoproteín gp 120).

2. Penetrácia - fúziou superkapsidy s bunkovou membránou alebo endocytózou (pinocytóza).

3. Uvoľňovanie nukleových kyselín - vyzlečenie nukleokapsidu a aktivácia nukleovej kyseliny.

4. Syntéza nukleových kyselín a vírusových proteínov , t.j. podriadenosť systémov hostiteľských buniek a ich práca na rozmnožovaní vírusu.

5. Montáž viriónov - spojenie replikovaných kópií vírusovej nukleovej kyseliny s kapsidovým proteínom.

6. Uvoľňovanie vírusových častíc z bunky získanie superkapsidy obalenými vírusmi.

formy vírusovej infekcie.

Na úrovni makroorganizmu sa hlavné formy vírusových lézií zásadne nelíšia od tých, ktoré sa pozorujú pri infekcii jednotlivých buniek vírusmi.

Produktívna vírusová infekcia s tvorbou dcérskych populácií a charakteristických klinických prejavov je možné len vtedy, ak sú v infikovanom organizme citlivé bunky, v ktorých sa uskutočňuje reprodukčný cyklus patogénu. Napríklad, pôvodca poliomyelitídy sa môže replikovať iba v bunkách gastrointestinálneho traktu a centrálneho nervového systému primátov a ľudí.

Abortívna infekcia sa vyvíja, keď patogén prenikne do necitlivých buniek (napríklad, keď sa vírus bovinnej leukémie dostane do ľudského tela) alebo do buniek, ktoré nie sú schopné zabezpečiť úplný reprodukčný cyklus (napríklad tie, ktoré sú v štádiu G0 bunkového cyklu). Schopnosť buniek udržiavať vírusovo špecifické reprodukčné procesy tiež potláča IFN, ktorého antivírusový účinok je namierený proti širokej škále vírusov.

Pretrvávajúca vírusová infekcia sa vyskytuje počas takejto interakcie medzi vírusom a infikovanou bunkou, keď táto pokračuje vo vykonávaní svojich vlastných bunkových funkcií. Ak sa infikované bunky rozdelia, vytvorí sa infikovaný klon. Zvýšenie počtu infikovaných buniek teda prispieva k zvýšeniu celkovej populácie patogénov v tele. Pretrvávajúce vírusové infekcie však zvyčajne narušujú funkciu buniek, čo nakoniec vedie ku klinickým prejavom. U ľudí vývoj perzistujúcich infekcií do určitej miery závisí od veku. Napríklad vnútromaternicová infekcia vírusom osýpok rubeoly alebo cytomegalovírusom (CMV) vedie k časovo obmedzenému pretrvávaniu patogénu. Výskyt symptómov je spojený so schopnosťou plodu vyvinúť imunitnú odpoveď na infekčné činidlo.

Latentná (skrytá) vírusová infekcia . Kým perzistujúce infekcie sú sprevádzané neustálym uvoľňovaním potomstva vírusových populácií, v latentných léziách sa tvoria sporadicky. Reprodukčný cyklus takýchto patogénov sa v neskorších štádiách prudko spomaľuje a aktivuje sa pod vplyvom rôznych faktorov.

Latentné infekcie sú charakteristické pre väčšinu herpesvírusov, ktoré spôsobujú recidivujúce a zvyčajne neprogredujúce ochorenia.

Inaparentné infekcie *z lat. in-, negácia, + arrareo, bytie + sú sprevádzané asymptomatickou cirkuláciou malých množstiev patogénu v jednotlivých orgánoch. Zároveň je možné identifikovať patogén iba špeciálnymi metódami. Takéto lézie sa odlišujú od asymptomatického nosičstva vysokou pravdepodobnosťou klinických prejavov. Tento termín sa používa pre množstvo infekcií, pri ktorých nie sú zjavné príznaky choroby. V praxi vírusových infekcií u ľudí sa často používa alternatívny termín "subklinická infekcia". V skutočnosti možno latentné infekcie považovať za chronicky sa vyskytujúce inaparatné infekcie, pri ktorých sa vytvorí rovnováha medzi organizmom a patogénom.

Spiaca (kryptogénna) vírusová infekcia - forma prejavu vírusovej infekcie, pri ktorej sa patogén v neaktívnom stave nachádza v oddelených ložiskách (napríklad v nervových gangliách). Klinicky sa infekcia prejaví až prudkým oslabením obranyschopnosti organizmu. Napríklad herpes vírus typu 3, ktorý spôsobuje ovčie kiahne počas počiatočnej infekcie, zostáva v tele po celý život. Opakovanie ochorenia vo forme pásového oparu je možné len pri zhoršenom imunitnom stave (najčastejšie v starobe).

Pomalé vírusové infekcie charakterizovaná dlhou inkubačnou dobou (mesiace a roky), počas ktorej sa patogén množí a spôsobuje čoraz zreteľnejšie poškodenie tkaniva. Pôvodne sa patogén množí v obmedzenej skupine buniek, no postupne ich infikuje čoraz väčší počet. Choroby končia rozvojom ťažkých lézií a smrťou pacienta. Medzi pomalé vírusové infekcie patrí subakútna sklerotizujúca panencefalitída, infekcia HIV atď.

№ 19 Typy interakcie vírusu s bunkou. štádiách rozmnožovania vírusov.
Typy interakcie vírusu s bunkou. Existujú tri typy interakcie medzi vírusom a bunkou: produktívna, abortívna a integračná.
produktívny typ- končí tvorbou novej generácie viriónov a smrťou (lýzou) infikovaných buniek (cytolytická forma). Niektoré vírusy opúšťajú bunky bez toho, aby ich zničili (necytolytická forma).
abortívny typ- nekončí tvorbou nových viriónov, pretože infekčný proces v bunke je prerušený v jednom zo štádií.
integratívny typ, alebo virogenéza- charakterizované inkorporáciou (integráciou) vírusovej DNA vo forme provírusu do bunkového chromozómu a ich koexistenciou (ko-replikáciou).
Reprodukcia vírusovvykonávané v niekoľkých etapách, ktoré sa postupne nahrádzajú: adsorpcia vírusu na bunku; prienik vírusu do bunky; "vyzliekanie" vírusu; biosyntéza vírusových zložiek v bunke; tvorba vírusov; uvoľnenie vírusov z bunky.
Adsorpcia.Interakcia vírusu s bunkou začína adsorpčným procesom, t.j. prichytením vírusov na povrch bunky. Ide o vysoko špecifický proces. Vírus sa adsorbuje na určitých častiach bunkovej membrány – na takzvaných receptoroch. Bunkové receptory môžu mať rôznu chemickú povahu, predstavujú proteíny, sacharidové zložky proteínov a lipidov, lipidy. Počet špecifických receptorov na povrchu jednej bunky sa pohybuje od 104 do 105. V dôsledku toho môžu byť na bunku adsorbované desiatky a dokonca stovky vírusových častíc.
Bunková penetrácia. Existujú dva spôsoby vstupu živočíšnych vírusov do bunky: viropexia a fúzia vírusového obalu s bunkovou membránou. Pri viropexii dochádza po adsorpcii vírusov k invaginácii (invaginácii) úseku bunkovej membrány a k tvorbe intracelulárnej vakuoly, ktorá obsahuje vírusovú časticu. Vakuola s vírusom môže byť transportovaná v akomkoľvek smere do rôznych častí cytoplazmy alebo bunkového jadra. Proces fúzie sa uskutočňuje jedným z povrchových vírusových proteínov kapsidového alebo superkapsidového obalu. Oba mechanizmy prieniku vírusu do bunky sa zrejme nevylučujú, ale dopĺňajú.
"Strip".Proces „vyzliekania“ spočíva v odstránení ochranných vírusových membrán a uvoľnení vnútornej zložky vírusu, ktorá môže spôsobiť infekčný proces. K „vyzliekaniu“ vírusov dochádza postupne, v niekoľkých fázach, v určitých oblastiach cytoplazmy alebo jadra bunky, na čo bunka využíva súbor špeciálnych enzýmov. V prípade prieniku vírusu fúziou vírusového obalu s bunkovou membránou sa proces prieniku vírusu do bunky spája s prvou fázou jej „vyzliekania“. Konečnými produktmi „vyzliekania“ sú jadro, nukleokapsida alebo nukleová kyselina vírusu.
Biosyntéza zložiek vírusu. Vírusová nukleová kyselina, ktorá prenikla do bunky, nesie genetickú informáciu, ktorá úspešne konkuruje genetickej informácii bunky. Narúša prácu bunkových systémov, potláča vlastný metabolizmus bunky a núti ju syntetizovať nové vírusové proteíny a nukleové kyseliny, ktoré sa používajú na stavbu vírusového potomstva.
Implementácia genetickej informácie vírusu sa uskutočňuje v súlade s procesmi transkripcie, translácie a replikácie.
Tvorba (zhromaždenie) vírusov. Syntetizované vírusové nukleové kyseliny a proteíny majú schopnosť špecificky sa navzájom „rozoznávať“ a ak je ich koncentrácia dostatočná, spontánne sa spájať v dôsledku hydrofóbnych, soľných a vodíkových väzieb.
Existujú nasledujúce všeobecné princípy zostavovania vírusov s rôznymi štruktúrami:
1. Tvorba vírusov je viacstupňový proces s tvorbou intermediárnych foriem;
2. Zostavenie jednoducho usporiadaných vírusov spočíva v interakcii molekúl vírusovej nukleovej kyseliny s kapsidovými proteínmi a vytvorením nukleokapsidov (napríklad poliovírusy). V komplexných vírusoch sa najskôr vytvoria nukleokapsidy, s ktorými interagujú superkapsidové obalové proteíny (napríklad vírusy chrípky);
3. K tvorbe vírusov nedochádza v intracelulárnej tekutine, ale na jadrových alebo cytoplazmatických membránach bunky;
4. Komplexne organizované vírusy v procese tvorby zahŕňajú zložky hostiteľskej bunky (lipidy, sacharidy).
Uvoľňovanie vírusov z bunky. Existujú dva hlavné typy výstupu vírusového potomstva z bunky. Prvý typ – výbušný – sa vyznačuje súčasným uvoľňovaním veľkého množstva vírusov. V tomto prípade bunka rýchlo zomrie. Tento režim ukončenia je charakteristický pre vírusy, ktoré nemajú superkapsidovú obálku. Druhým typom je pučanie. Je to vlastné vírusom, ktoré majú superkapsidový obal. V konečnom štádiu zostavovania sú nukleokapsidy komplexných vírusov fixované na bunkovej plazmatickej membráne modifikovanej vírusovými proteínmi a postupne ju vyčnievajú. V dôsledku výčnelku sa vytvorí "oblička" obsahujúca nukleokapsid. "Oblička" sa potom oddelí od bunky. Vonkajší obal týchto vírusov sa teda vytvára počas ich výstupu z bunky. Pomocou tohto mechanizmu môže bunka produkovať vírus po dlhú dobu, pričom si do určitej miery zachováva svoje základné funkcie.
Čas potrebný na úplný cyklus reprodukcie vírusu sa pohybuje od 5-6 hodín (vírusy chrípky, kiahne atď.) až po niekoľko dní (vírusy osýpok, adenovírusy atď.). Výsledné vírusy sú schopné infikovať nové bunky a podstúpiť v nich vyššie uvedený reprodukčný cyklus.

Proces reprodukcie vírusov možno podmienečne rozdeliť na 2 fázy . Prvá fáza zahŕňa 3 etapy: 1) adsorpcia vírusu na citlivé bunky; 2) prienik vírusu do bunky; 3) deproteinizácia vírusu . Druhá fáza zahŕňa štádiá realizácie vírusového genómu: 1) transkripcia, 2) translácia, 3) replikácia, 4) zostavenie, dozrievanie vírusových častíc a 5) uvoľnenie vírusu z bunky.

Interakcia vírusu s bunkou začína procesom adsorpcie, t.j. prichytením vírusu na povrch bunky.

Adsorpcia je špecifická väzba viriónového proteínu (antireceptora) na komplementárnu bunkovú povrchovú štruktúru – bunkový receptor. Chemickou povahou patria receptory, na ktorých sú vírusy fixované, do dvoch skupín: mukoproteín a lipoproteín. Vírusy chrípky, parainfluenzy, adenovírusy sú fixované na mukoproteínových receptoroch. Enterovírusy, herpes vírusy, arbovírusy sú adsorbované na lipoproteínových receptoroch bunky. K adsorpcii dochádza len v prítomnosti určitých elektrolytov, najmä Ca2+ iónov, ktoré neutralizujú nadbytočné aniónové náboje vírusu a povrchu bunky a znižujú elektrostatické odpudzovanie vírusu a bunky, a potom prichádza špecifická interakcia väzbového proteínu viriónu s špecifické skupiny na plazmatickej membráne bunky. Jednoduché ľudské a zvieracie vírusy obsahujú väzbové proteíny v kapside. V komplexne organizovaných vírusoch sú pripojovacie proteíny súčasťou superkapsidy. Môžu mať formu vlákien (vlákna v adenovírusoch) alebo hrotov, hubovitých štruktúr v mixo-, retro-, rhabdo- a iných vírusoch. Spočiatku vzniká jednoduchá väzba viriónu s receptorom – takéto pripojenie je krehké – adsorpcia je reverzibilná. Aby došlo k ireverzibilnej adsorpcii, medzi vírusovým receptorom a bunkovým receptorom sa musia objaviť viaceré väzby, t.j. stabilné multivalentné pripojenie. Počet špecifických receptorov na povrchu jednej bunky je 10 4 -10 5 . Receptory pre niektoré vírusy, ako sú arbovírusy. sa nachádzajú na bunkách stavovcov aj bezstavovcov, v prípade iných vírusov iba na bunkách jedného alebo viacerých druhov.

Prenikanie ľudských a zvieracích vírusov do bunky prebieha dvoma spôsobmi: 1) viropexiou (pinocytóza); 2) fúzia vírusového superkapsidového obalu s bunkovou membránou. Bakteriofágy majú svoj vlastný penetračný mechanizmus, takzvanú injekčnú striekačku, kedy sa v dôsledku kontrakcie bielkovinového výrastku fága nukleová kyselina takpovediac vstrekne do bunky.

Deproteinizácia vírusového uvoľnenia hemiómu vírusu z vírusových ochranných obalov prebieha buď pomocou vírusových enzýmov alebo pomocou bunkových enzýmov. Konečnými produktmi deproteinizácie sú nukleové kyseliny alebo nukleové kyseliny spojené s vnútorným vírusovým proteínom. Potom nastáva druhá fáza vírusovej reprodukcie, ktorá vedie k syntéze vírusových zložiek.

Transkripcia je prepisovanie informácie z DNA alebo RNA vírusu na mRNA podľa zákonov genetického kódu.

Translácia je proces prekladu genetickej informácie obsiahnutej v mRNA do špecifickej sekvencie aminokyselín.

Replikácia je proces syntézy molekúl nukleových kyselín homológnych s vírusovým genómom.

Implementácia genetickej informácie vo vírusoch obsahujúcich DNA prebieha rovnakým spôsobom ako v bunkách:

DNA transkripcia a RNA translačný proteín

RNA transkripcia a RNA translačný proteín

Vo vírusoch s pozitívnym RNA genómom (togavírusy, pikornavírusy) transkripcia chýba:

RNA translačný proteín

Retrovírusy majú jedinečný spôsob prenosu genetickej informácie:

RNA reverzná transkripcia DNA transkripcia i-RNA translačný proteín

DNA sa integruje s genómom hostiteľskej bunky (provírus).

Potom, čo bunka vyprodukuje vírusové zložky, začína posledná fáza vírusovej reprodukcie, zostavovanie vírusových častíc a uvoľňovanie viriónov z bunky. Uvoľňovanie viriónov z bunky sa uskutočňuje dvoma spôsobmi: 1) „výbuchom“ bunky, v dôsledku čoho je bunka zničená. Táto cesta je vlastná jednoduchým vírusom (picorna-, reo-, papova- a adenovírusom), 2) opúšťajú bunky pučaním. Inherentná vo vírusoch obsahujúcich superkapsid. Pri tejto metóde bunka neumiera okamžite, môže dať viacero vírusových potomkov, kým sa jej zdroje nevyčerpajú.

Metódy kultivácie vírusov

Na kultiváciu vírusov v laboratórnych podmienkach sa používajú tieto živé objekty: 1) bunkové kultúry (tkanivá, orgány); 2) kuracie embryá; 3) laboratórne zvieratá.

Bunkové kultúry

Najbežnejšie sú jednovrstvové bunkové kultúry, ktoré možno rozdeliť na 1) primárne (primárne trypsinizované), 2) semitransplantovateľné (diploidné) a 3) transplantovateľné.

Pôvod delia sa na embryonálne, neoplastické a z dospelých organizmov; morfogenézou- na fibroblastoch, epiteloch a pod.

Primárny bunkové kultúry sú bunky akéhokoľvek ľudského alebo zvieracieho tkaniva, ktoré majú schopnosť rásť ako monovrstva na plastovom alebo sklenenom povrchu potiahnutom špeciálnym živným médiom. Životnosť takýchto plodín je obmedzená. V každom prípade sa získavajú z tkaniva po mechanickom rozomletí, ošetrení proteolytickými enzýmami a štandardizácii počtu buniek. Primárne kultúry odvodené z opičích obličiek, ľudských embryonálnych obličiek, ľudského amnia, kuracích embryí sa široko používajú na izoláciu a akumuláciu vírusov, ako aj na výrobu vírusových vakcín.

polotransplantovateľné (alebo diploidný ) bunkové kultúry - bunky rovnakého typu, schopné vydržať až 50-100 pasáží in vitro, pričom si zachovávajú svoju pôvodnú diploidnú sadu chromozómov. Diploidné kmene ľudských embryonálnych fibroblastov sa používajú ako na diagnostiku vírusových infekcií, tak aj na výrobu vírusových vakcín.

transplantované bunkové línie sa vyznačujú potenciálnou nesmrteľnosťou a heteroploidným karyotypom.

Zdrojom transplantovaných línií môžu byť primárne bunkové kultúry (napríklad SOC, PES, VNK-21 - z obličiek jednodňových sýrskych škrečkov; PMS - z obličky morčiat atď.), ktorých jednotlivé bunky vykazujú tendenciu k nekonečnému rozmnožovaniu in vitro. Súhrn zmien vedúcich k objaveniu sa takýchto znakov z buniek sa nazýva transformácia a bunky transplantovaných tkanivových kultúr sa nazývajú transformované.

Ďalším zdrojom transplantovaných bunkových línií sú zhubné novotvary. V tomto prípade dochádza k transformácii buniek in vivo. Vo virologickej praxi sa najčastejšie využívajú tieto línie transplantovaných buniek: HeLa - získané z karcinómu krčka maternice; Ner-2 - z karcinómu hrtana; Detroit-6 - z metastáz rakoviny pľúc do kostnej drene; RH pochádza z ľudskej obličky.

Na kultiváciu buniek sú potrebné živné pôdy, ktoré sa podľa účelu delia na rastové a podporné. Zloženie rastového média by malo obsahovať viac živín, aby sa zabezpečila aktívna reprodukcia buniek na vytvorenie monovrstvy. Podporné médiá by mali zabezpečiť prežitie buniek v už vytvorenej monovrstve počas reprodukcie vírusov v bunke.

Štandardné syntetické médiá, ako sú syntetické 199 médiá a ihličkové médiá, sú široko používané. Bez ohľadu na účel sú všetky živné médiá pre bunkové kultúry navrhnuté na báze vyváženého soľného roztoku. Najčastejšie je to Hankovo ​​riešenie. Neoddeliteľnou zložkou väčšiny rastových médií je krvné sérum zvierat (teľa, býk, kôň), bez prítomnosti 5-10 % z nich nedochádza k reprodukcii buniek a tvorbe monovrstvy. Sérum nie je súčasťou udržiavacieho média.

Izolácia vírusov v bunkových kultúrach a spôsoby ich indikácie.

Pri izolácii vírusov z rôznych infekčných materiálov od pacienta (krv, moč, výkaly, hlienový výtok, výtery z orgánov) sa používajú bunkové kultúry, ktoré sú na údajný vírus najcitlivejšie. Na infekciu sa používajú kultúry v skúmavkách s dobre vyvinutou monovrstvou buniek. Pred infikovaním buniek sa odstráni živné médium a do každej skúmavky sa pridá 0,1 až 0,2 ml suspenzie testovaného materiálu vopred ošetreného antibiotikami na usmrtenie baktérií a húb. Po 30-60 min. kontakt vírusu s bunkami, odstráňte prebytočný materiál, pridajte podporné médium do skúmavky a nechajte ju v termostate, kým sa nezistia známky reprodukcie vírusu.

Indikátorom prítomnosti vírusu v infikovaných bunkových kultúrach môže byť:

1) vývoj špecifickej degenerácie buniek - cytopatický účinok vírusu (CPE), ktorý má tri hlavné typy: okrúhla alebo malobunková degenerácia; tvorba mnohojadrových obrovských buniek - sympplastov; vývoj ložísk bunkovej proliferácie, pozostávajúcich z niekoľkých vrstiev buniek;

2) detekcia intracelulárnych inklúzií umiestnených v cytoplazme a jadrách postihnutých buniek;

3) pozitívny hamaglutinačný test (RHA);

4) pozitívna hemadsorpčná reakcia (RGAds);

5) fenomén tvorby plakov: monovrstva buniek infikovaných vírusom je pokrytá tenkou vrstvou agaru s prídavkom neutrálneho červeného indikátora (ružové pozadie). V prítomnosti vírusu v bunkách sa na ružovom agarovom pozadí vytvárajú bezfarebné zóny („plaky“).

6) v neprítomnosti CPE alebo GA je možné nastaviť interferenčnú reakciu: študovaná kultúra je znovu infikovaná vírusom, ktorý spôsobuje CPE. V pozitívnom prípade nedôjde k CPP (interferenčná reakcia je pozitívna). Ak v testovanom materiáli nebol žiadny vírus, pozoruje sa CPE.

Izolácia vírusov v kuracích embryách.

Na virologické štúdie sa používajú kuracie embryá vo veku 7 až 12 dní.

Pred infekciou určiť životaschopnosť embrya. Pri ovoskopii sú živé embryá mobilné, cievny vzor je jasne viditeľný. Jednoduchou ceruzkou označte hranice vzduchového vaku. Kuracie embryá sa infikujú za aseptických podmienok sterilnými nástrojmi, pričom škrupina nad vzdušným priestorom sa predtým ošetrila jódom a alkoholom.

Spôsoby infekcie kuracích embryí môžu byť rôzne: aplikácia vírusu na chorion-alantoidnú membránu, do amniotickej a alantoidnej dutiny, do žĺtkového vaku. Výber metódy infekcie závisí od biologických vlastností skúmaného vírusu.

Indikácia vírusu v kuracom embryu sa uskutočňuje úhynom embrya, pozitívnym hemaglutinačným testom na skle s alantoidnou alebo plodovou vodou, ložiskovými léziami ("plakmi") na chorion-alantoidnej membráne.

III. Izolácia vírusov u laboratórnych zvierat.

Laboratórne zvieratá možno použiť na izoláciu vírusov z infekčného materiálu, ak nie je možné použiť vhodnejšie systémy (bunkové kultúry alebo kuracie embryá). Berú hlavne novonarodené biele myši, škrečky, morčatá, potkany. Infikujte zvieratá podľa princípu cytotropizmu vírusu: pneumotropné vírusy sa injikujú intranazálne, neurotropné - intracerebrálne, dermatotropné - na kožu.

Indikácia vírusu je založená na objavení sa príznakov ochorenia u zvierat, ich uhynutí, patomorfologických a patohistologických zmenách v tkanivách a orgánoch, ako aj na pozitívnej hemaglutinačnej reakcii s extraktmi z orgánov.

Synopsa Vírusy

Vírusy hrajú v ľudskom živote veľkú úlohu. Sú pôvodcami množstva nebezpečných chorôb - kiahne, hepatitída, encefalitída, rubeola, besnota, chrípka atď.

V roku 1892 ruský vedec D.I. Ivanovský opísal nezvyčajné vlastnosti pôvodcu tabakovej choroby - tabakovej mozaiky. Tento patogén prešiel cez bakteriálne filtre a navyše nerástol na umelých živných pôdach. Zdravé rastliny tabaku by teda mohli byť infikované bezbunkovým filtrátom zo šťavy chorej rastliny.

Po koľkých rokoch bol objavený patogén slintačky a krívačky, ktorý prešiel aj cez bakteriálne filtre.

V roku 1898 Beijerinck vymyslel nové slovo „vírus“ (z latinského jedu) na označenie infekčnej povahy určitých filtrovaných rastlinných tekutín.

V roku 1917 F. d'Errel objavil bakteriofág - vírus, ktorý infikuje baktérie. Štruktúra vírusu však zostávala pre vedcov dlho záhadou. Práve preto boli vírusy medzi prvými objektmi skúmanými pod elektrónovým mikroskopom hneď po jeho objavení v 30. rokoch minulého storočia.

Rozdiely medzi vírusmi a inými organizmami:

1. Vírusy sú drobné organizmy (v priemere sú 50-krát menšie ako baktérie), nie sú viditeľné svetelným mikroskopom. 30-300 nm.

2. Vírusy nemajú bunkovú štruktúru. Ak považujeme bunkovú štruktúru za povinnú vlastnosť živých, vírusy nie sú živé. Majú však genetický materiál a sú schopné samoreprodukcie. Existuje predpoklad, že vírusy sú genetický materiál, ktorý kedysi unikol z bunky a zachoval si schopnosť reprodukcie pri návrate do bunkového prostredia.

3. Vírusy sa môžu množiť iba vo vnútri živej bunky a nie sú to nezávislé organizmy.

4. Vírusy pozostávajú z jednej malej molekuly nukleovej kyseliny (DNA alebo RNA) a sú obklopené proteínovým obalom

5. Na rozdiel od bunkových organizmov vírusy nedokážu syntetizovať proteíny samy. Vírus vnesie do bunky iba svoju vlastnú nukleovú kyselinu, ktorá znefunkční hostiteľskú DNA a dá bunke pokyn, aby syntetizovala proteíny, ktoré potrebuje (na zostavenie a uvoľnenie nových kópií vírusu).

Štruktúra vírusov

Vírusová častica, tiež tzv virion, pozostáva z nukleovej kyseliny (DNA alebo RNA) obklopenej proteínovým obalom. Táto škrupina sa nazýva kapsid. Kapsida sa skladá z podjednotiek kapsoméry. Kapsida nukleovej kyseliny nukleokapsid- môže byť nahá alebo mať dodatočnú mušľu ( vírusy chrípky a herpesu).

Najjednoduchšie vírusy, ako je vírus tabakovej mozaiky, majú iba proteínovú kapsidu. Vírus bradavíc, adenovírusy, je usporiadaný podobne.

Vírusové častice môžu byť tyčinkovité alebo vláknité, majú tvar mnohostenu.

Interakcia vírusu s bunkou

1. Rozpoznanie svojej bunky vírusom. Prieniku vírusu spravidla predchádza jeho naviazanie na špecifický receptorový proteín na povrchu bunky.

2. Adsorpcia – prichytenie viriónu k povrchu bunky. Väzba sa uskutočňuje pomocou špeciálnych proteínov na povrchu vírusovej častice, ktoré rozpoznávajú zodpovedajúci receptor na povrchu bunky.. Ako kľúč od hradu.

3. Prienik cez membránu. Časť membrány, ku ktorej sa vírus pripojil, sa ponorí do cytoplazmy a zmení sa na vakuolu, ktorá sa potom môže spojiť s jadrom.

4. "Vyzliekanie" - uvoľnenie z kapsidy. Vyskytuje sa buď na bunkovom povrchu alebo v dôsledku deštrukcie kapsidy bunkovými enzýmami v cytoplazme.

5. Kopírovanie (reduplikácia) vírusovej nukleovej kyseliny.

6. Syntéza vírusových proteínov.

7. Zostavenie viriónov v jadre alebo cytoplazme.

8. Uvoľnenie viriónov z bunky. U niektorých vírusov sa to deje „výbuchom“, v dôsledku čoho je narušená celistvosť bunky a tá odumiera. Iné vírusy sa vylučujú spôsobom, ktorý pripomína pučanie. V tomto prípade si hostiteľské bunky dokážu udržať svoju životaschopnosť po dlhú dobu. Virióny sa z bunky uvoľňujú rôznou rýchlosťou. Pri niektorých typoch infekcie môžu virióny zostať vo vnútri bunky po dlhú dobu bez toho, aby ju zničili.

Bakteriálne vírusy

Vírusy napádajúce baktérie , sa nazývajú bakteriofágy alebo jednoducho fágy.

Štruktúra bakteriofágov hlavne študované na príklade T-fágu Eccherichia coli(kolifág). Kolifág pozostáva z mnohostennej hlavy a chvosta. Hlava sa skladá z kapsomérov a vo vnútri obsahuje DNA. Chvost má zložitú štruktúru a pozostáva z dutej tyče, sťahovacej pošvy, ktorá ju obklopuje, a bazálnej platničky s hrotmi a vláknami (nevyhnutné pre adsorpciu na hostiteľskej bunke).

Vstup bakteriofága do bunky

Hrubé bunkové steny baktérií neumožňujú vírusu klesnúť do cytoplazmy, ako pri infikovaní živočíšnych buniek. Preto bakteriofág vloží do bunky dutú tyčinku a pretlačí ňou nukleovú kyselinu v hlave.

Objav vírusov D.I. Ivanovského v roku 1892. položil základ pre rozvoj vedy o virológii. Jeho rýchlejší rozvoj umožnil vynález elektrónového mikroskopu, vývoj metódy kultivácie mikroorganizmov v bunkových kultúrach.

V súčasnosti je virológia rýchlo sa rozvíjajúcou vedou, čo je spôsobené niekoľkými dôvodmi:

Vedúca úloha vírusov v ľudskej infekčnej patológii (príkladmi sú vírus chrípky, vírus HIV-ľudskej imunodeficiencie, cytomegalovírus a iné herpesvírusy) na pozadí takmer úplnej absencie špecifických liekov na chemoterapiu;

Použitie vírusov na riešenie mnohých základných otázok biológie a genetiky.

Základné vlastnosti vírusov (a plazmidov) v ktorých sa líšia od zvyšku živého sveta.

1. Ultramikroskopické rozmery (merané v nanometroch). Veľké vírusy (vírus kiahní) môžu dosiahnuť veľkosti 300 nm, malé - od 20 do 40 nm. 1 mm = 1 000 um, 1 um = 1 000 nm.

3. Vírusy nie sú schopné rastu a binárneho štiepenia.

4. Vírusy sa rozmnožujú tak, že sa rozmnožujú v infikovanej hostiteľskej bunke pomocou vlastnej genómovej nukleovej kyseliny.

6. Biotopom vírusov sú živé bunky - baktérie (ide o bakteriálne vírusy alebo bakteriofágy), rastlinné, živočíšne a ľudské bunky.

Všetky vírusy existujú v dvoch kvalitatívne odlišných formách: extracelulárny - virión a intracelulárny - vírus. Taxonómia týchto predstaviteľov mikrokozmu je založená na charakteristikách viriónov - konečnej fázy vývoja vírusov.

Štruktúra (morfológia) vírusov

1. Vírusový genóm tvoria nukleové kyseliny reprezentované jednovláknovými molekulami RNA (vo väčšine RNA vírusov) alebo dvojvláknovými molekulami DNA (vo väčšine DNA vírusov).

2. kapsid- proteínový obal, v ktorom je zabalená genómová nukleová kyselina. Kapsida sa skladá z rovnakých proteínových podjednotiek - kapsoméry. Existujú dva spôsoby balenia kapsomérov do kapsidy - špirálový (helikálne vírusy) a kubický (sférické vírusy).

So špirálovou symetriou proteínové podjednotky sú usporiadané v špirále a medzi nimi, tiež v špirále, je uložená genómová nukleová kyselina (vláknité vírusy). S kubickým typom symetrie virióny môžu byť vo forme mnohostenov, najčastejšie - dvadsaťstenov - dvadsaťsteny.

3. Jednoducho usporiadané vírusy majú len nukleokapsid t.j. komplex genómu s kapsidou a nazývajú sa „nahý“.

4. Iné vírusy majú na vrchnej časti kapsidy ďalšiu membránu podobnú škrupinu, ktorú vírus získa v čase výstupu z hostiteľskej bunky - superkapsid. Takéto vírusy sa nazývajú "oblečené".

Okrem vírusov existujú ešte jednoduchšie formy prenosných agens – plazmidy, viroidy a prióny.

Hlavné fázy interakcie vírusu s hostiteľskou bunkou

1. Adsorpcia je spúšťací mechanizmus spojený s interakciou špecifické receptory vírusu a hostiteľa (pre vírus chrípky - hemaglutinín, pre vírus ľudskej imunodeficiencie - glykoproteín gp 120).

2. Penetrácia - fúziou superkapsidy s bunkovou membránou alebo endocytózou (pinocytóza).

3. Uvoľnenie nukleových kyselín – „vyzliekanie“ nukleokapsidu a aktivácia nukleovej kyseliny.

4. Syntéza nukleových kyselín a vírusových proteínov, t.j. podriadenie systémov hostiteľských buniek a ich práca na reprodukcii vírusu.

5. Zostavenie viriónov – spojenie replikovaných kópií vírusovej nukleovej kyseliny s kapsidovým proteínom.

6. Uvoľnenie vírusových častíc z bunky, získanie superkapsidu obalenými vírusmi.

Výsledky interakcie vírusov s hostiteľskou bunkou

1. Abortívny proces- keď sú bunky zbavené vírusu:

Pri infikovaní defektný vírus, na replikáciu ktorého je potrebný vírus - asistent, nezávislá replikácia týchto vírusov je nemožná (tzv. viroidy). Napríklad vírus hepatitídy delta (D) sa môže replikovať iba v prítomnosti vírusu hepatitídy B, jeho antigénu Hbs, adeno-asociovaného vírusu v prítomnosti adenovírusu);

Keď vírus infikuje bunky, ktoré sú voči nemu geneticky necitlivé;

Infikovaním citlivých buniek vírusom za nepermisívnych podmienok.

2. produktívny proces- replikácia (výroba) vírusov:

- bunková smrť (lýza)(cytopatický účinok) - výsledok intenzívnej reprodukcie a tvorby veľkého počtu vírusových častíc - charakteristický výsledok produktívneho procesu spôsobeného vírusmi s vysokou cytopatogenitou. Cytopatický účinok pôsobenia na bunkové kultúry u mnohých vírusov má pomerne rozpoznateľný špecifický charakter;

- stabilná interakcia ktorá nevedie k bunkovej smrti (pretrvávajúce a latentné infekcie) – tzv vírusová transformácia bunky.

3. Integračný proces- integrácia vírusového genómu s genómom hostiteľskej bunky. Ide o špeciálny variant výrobného procesu podľa typu stabilnej interakcie. Vírus sa replikuje spolu s genómom hostiteľskej bunky a môže byť dlhý čas latentný. Vložené do DNA - hostiteľského genómu môžu len DNA - vírusy (princíp "DNA - v DNA"). Jediné RNA vírusy schopné integrácie do genómu hostiteľskej bunky, retrovírusy, majú na to špeciálny mechanizmus. Znakom ich reprodukcie je syntéza provírusovej DNA na báze genómovej RNA pomocou enzýmu reverznej transkriptázy, po ktorej nasleduje integrácia DNA do hostiteľského genómu.

Základné metódy kultivácie vírusov

1. V tele laboratórnych zvierat.

2. V kuracích embryách.

3. V bunkových kultúrach - hlavná metóda.

Typy bunkových kultúr

1. Primárne (trypsinizované) kultúry- fibroblasty kuracích embryí (FEC), ľudské (FEC), obličkové bunky rôznych zvierat a pod. Primárne kultúry sa získavajú z buniek rôznych tkanív častejšie drvením a trypsinizáciou, používajú sa jednorazovo, t.j. vždy je potrebné mať príslušné orgány alebo tkanivá.

2. Diploidné bunkové línie vhodné na redisperziu a rast, zvyčajne nie viac ako 20 pasáží (stratia svoje pôvodné vlastnosti).

3. prepletené línie(heteroploidné kultúry), schopné viacnásobnej disperzie a transplantácie, t.j. viacerých pasáží, sú najvhodnejšie pri virologickej práci - napríklad nádorové bunkové línie Hela, Hep atď.

Špeciálne živné pôdy pre bunkové kultúry

Používajú sa rôzne syntetické virologické živné médiá komplexného zloženia, vrátane veľkého súboru rôznych rastových faktorov – médium 199, ihla, Hanksov roztok, hydrolyzát laktalbumínu. Do média sa pridávajú stabilizátory pH (Hepes), krvné sérum rôznych druhov (za najúčinnejšie sa považuje fetálne teľacie sérum), L-cysteín a L-glutamín.

V závislosti od funkčného využitia média môže byť rast(s vysokým obsahom krvného séra) - používajú sa na pestovanie bunkových kultúr pred zavedením vírusových vzoriek a podporujúce(s menším množstvom alebo žiadnym sérom) - na udržiavanie bunkových kultúr infikovaných vírusom.

Zistiteľné prejavy vírusovej infekcie bunkových kultúr

1. Cytopatický účinok.

2. Identifikácia telies inklúzií.

3. Detekcia vírusov fluorescenčnými protilátkami (MFA), elektrónová mikroskopia, autorádiografia.

4. Farebný test. Zvyčajná farba použitého kultivačného média obsahujúceho fenolovú červeň ako indikátor pH za optimálnych kultivačných podmienok pre bunky (pH približne 7,2) je červená. Reprodukcia buniek mení pH a podľa toho aj farbu média z červenej na žltú v dôsledku posunu pH na kyslú stranu. Počas rozmnožovania v bunkových kultúrach vírusov dochádza k lýze buniek, nedochádza k zmenám pH a farby média.

5. Detekcia hemaglutinínu vírusov - hemadsorpcia, hemaglutinácia.

6. Metóda plakov (tvorba plakov). V dôsledku cytolytického pôsobenia mnohých vírusov na bunkové kultúry sa vytvárajú zóny hromadného odumierania buniek. Zistia sa plaky - vírusové „bunkovo-negatívne“ kolónie.

Vírusová nomenklatúra.

Názov rodiny vírusov končí na „viridae“, rod končí na „vírus“, pre tento druh sa zvyčajne používajú špeciálne názvy, napríklad vírus rubeoly, vírus ľudskej imunodeficiencie - HIV, vírus ľudskej parainfluenzy typu 1 atď.

Bakteriálne vírusy (bakteriofágy)

Prirodzeným biotopom fágov je bakteriálna bunka, takže fágy sú všadeprítomné (napríklad v odpadových vodách). Fágy majú biologické vlastnosti, ktoré sú charakteristické pre iné vírusy.

Morfologicky najbežnejší typ fágov je charakterizovaný prítomnosťou hlavy - dvadsaťstenu, výbežku (chvost) so skrutkovicovou symetriou (často má dutú tyčinku a sťahovaciu pošvu), tŕňov a výbežkov (vlákna), t.j. pripomínajú spermie.

Interakcia fágov s bunkou (baktériou) je prísne špecifická, t.j. bakteriofágy sú schopné infikovať len určité druhy a fágové typy baktérie.

Hlavné fázy interakcie fágov a baktérií

1. Adsorpcia (interakcia špecifických receptorov).

2. Zavedenie vírusovej DNA (fágová injekcia) sa uskutočňuje lýzou časti bunkovej steny látkami, ako je lyzozým, zmrštením obalu, pretlačením chvostovej tyčinky cez cytoplazmatickú membránu do bunky a injekciou DNA do cytoplazmy. .

3. Reprodukcia fágov.

4. Výstup dcérskych populácií.

Základné vlastnosti fágov

Rozlišovať virulentné fágy, schopný spôsobiť produktívnu formu procesu, a mierne fágy ktoré spôsobujú redukčnú fágovú infekciu (redukcia fágov). V druhom prípade sa fágový genóm v bunke nereplikuje, ale je zavedený (integrovaný) do chromozómu hostiteľskej bunky (DNA v DNA), fág sa zmení na profágia. Tento proces bol pomenovaný lyzogenéza. Ak v dôsledku zavedenia fága do chromozómu bakteriálnej bunky získa nové dedičné znaky, táto forma bakteriálnej variability sa nazýva tzv. lyzogénna (fágová) konverzia. Bakteriálna bunka, ktorá vo svojom genóme nesie profág, sa nazýva lyzogénna, pretože profág, ak je narušená syntéza špeciálneho represorového proteínu, môže prejsť do lytického vývojového cyklu a spôsobiť produktívnu infekciu s bakteriálnou lýzou.

Mierne fágy sú dôležité pri výmene genetického materiálu medzi baktériami - v transdukcii(jedna z foriem genetickej výmeny). Napríklad len pôvodca záškrtu má schopnosť produkovať exotoxín, do chromozómu ktorého je integrovaný stredne silný profág, ktorý nesie operón tox zodpovedný za syntézu difterického exotoxínu. Mierny tox fág spôsobuje lyzogénnu premenu netoxického difterického bacilu na toxigénny.

Podľa spektra účinku na baktérie sa fágy delia na:

Polyvalentné (lýza blízko príbuzných baktérií, ako je salmonela);

Monovalentné (lýzujú baktérie jedného druhu);

Typovo špecifické (lyzovať len určité fagovary patogénu).

Na hustých médiách sa fágy detegujú častejšie pomocou spotového testu (tvorba negatívnej škvrny počas rastu kolónií) alebo metódou agarovej vrstvy (Gracia titrácia).

Praktické využitie bakteriofágov.

1. Na identifikáciu (definícia typu fágu).

2. Na fágovú profylaxiu (zastavenie prepuknutia choroby).

3. Na fágovú terapiu (liečba dysbiózy).

4. Zhodnotiť hygienický stav životného prostredia a epidemiologický rozbor.