Čo ovplyvňuje vírus besnoty. Sanitárna mikrobiológia

1. Premenlivé, pevné a kardinálne kríže V tejto kapitole sme zhromaždili staré diktáty, ktoré použila Morya v rámci prípravy na písanie ďalšej knihy o astrológii. Nikdy sme však nemohli začať túto plánovanú prácu z jednoduchého dôvodu

MU 3.3.1.1099-02

METODICKÉ POKYNY

3.3.1. VAKCÍNOVÁ PREVENCIA

Bezpečnosť práce s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty

Dátum predstavenia 2002-04-01

1. VYVINUTÉ Ruským výskumným inštitútom "Mikrobi" Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie (doktor lekárskych vied I.A. Dyatlov, Ph.D. A.K. Nikiforov, Ph.D. S.A. Eremin); Štátny výskumný ústav pre štandardizáciu a kontrolu medicínskych biologických prípravkov pomenovaný po V.I. L.A. Tarasevič z Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie (doktor lekárskych vied A.A. Movsesyants, kandidát lekárskych vied I.A. Ozeretskovsky, výskumný pracovník G.B. Ageenko).

3. SCHVÁLENÉ hlavným štátnym sanitárom Ruskej federácie - prvým námestníkom ministra zdravotníctva Ruskej federácie G.G.Oniščenkom dňa 15.1.2002. Vstúpila do platnosti 1. apríla 2002.

4. PRVÝ KRÁT PREDSTAVENÉ.

1 oblasť použitia

1 oblasť použitia

1.1. Tieto usmernenia boli vypracované v súlade s federálnym zákonom „O sanitárnej a epidemiologickej pohode obyvateľstva“ z 30. marca 1999 N 52-FZ, „Nariadeniami o štátnej sanitárnej a epidemiologickej regulácii“ a hygienickými predpismi „Bezpečnosť práce s mikroorganizmy III-IV skupín patogenity a helminty. SP 1.2.731-99".

1.2. Požiadavky týchto usmernení sú povinné pre zdravotnícke orgány a inštitúcie zakladajúcich subjektov Ruskej federácie.

2. Regulačné odkazy

Tieto usmernenia používajú odkazy na nasledujúce regulačné dokumenty:

2.1. Federálny zákon „O sanitárnej a epidemiologickej pohode obyvateľstva“ N 52-FZ z 30. marca 1999

2.2. Hygienické pravidlá "Bezpečnosť práce s mikroorganizmami III-IV skupín patogenity a helmintov. SP 1.2.731-99" .

2.3. Sanitárne pravidlá "Postup účtovania, skladovania, prenosu a prepravy mikroorganizmov I-IV skupín patogenity. SP 1.2.036-95" .

2.5. Schválené hygienické pravidlá pre usporiadanie, vybavenie a údržbu experimentálnych biologických kliník (vivárií). Ministerstvo zdravotníctva ZSSR zo 6. apríla 1973 N 1045-73.

2.6. Stavebné normy a pravidlá "Verejné budovy a stavby". SNiP 2.08.02-89 a "Manuál pre projektovanie zdravotníckych zariadení" v 5 zväzkoch. - V.1, 3, 5. Gosgrazhdanstroy. - M., 1989.

2.7. OST-42-21-2-85 "Sterilizácia a dezinfekcia zdravotníckych pomôcok. Metódy, prostriedky. Režimy".

2.8. Schválený príkaz „O schválení dočasných zoznamov škodlivých, nebezpečných látok a výrobných faktorov, ako aj prác, pri výkone ktorých sa vykonávajú predbežné a periodické lekárske prehliadky“. Ministerstvo zdravotníctva a lekárskeho priemyslu a Štátny výbor pre sanitárny a epidemiologický dohľad Ruska zo dňa 5.10.95 N 280/88.

2.9. "Pokyny na obsluhu a kontrolu účinnosti ventilačných zariadení v zdravotníckych zariadeniach", schválené. Ministerstvo zdravotníctva ZSSR z 20.3.1975

2.11. Schválené „Smernice pre používanie baktericídnych lámp na dezinfekciu vzduchu a povrchov v miestnostiach“. Ministerstvo zdravotníctva a lekárskeho priemyslu Ruska zo dňa 28.02.95 N 16-11 / 03-06.

2.12. Schválené „Smernice pre monitorovanie prevádzky parných a vzduchových sterilizátorov“. Ministerstvo zdravotníctva ZSSR z 28. februára 1991 N 15 / 6-5.

2.13. Schválené „Bezpečnostné predpisy, priemyselná sanitácia a sanitárny a protiepidemický režim pre podniky na výrobu bakteriálnych a vírusových prípravkov“. Ministerstvo zdravotníctva ZSSR z 30.8.1979

2.14. Metódy laboratórneho výskumu besnoty. SZO. - Ženeva, 1975.

3. Pojmy, definície a skratky

Havária je havarijná situácia, pri ktorej vzniká reálna alebo potenciálna možnosť úniku patogénu do ovzdušia výrobného priestoru, životného prostredia alebo infikovania personálu.

Biologická bezpečnosť - systém biomedicínskych, organizačných a inžinierskych opatrení a prostriedkov zameraných na ochranu pracujúceho personálu, verejnosti a životného prostredia pred účinkami patogénnych biologických činiteľov.

Biologická bezpečnostná skriňa je konštrukcia slúžiaca na fyzikálnu izoláciu (zadržiavanie a kontrolované odstraňovanie z pracovného priestoru) mikroorganizmov, aby sa zabránilo možnosti infekcie personálu a kontaminácii ovzdušia pracovného priestoru a prostredia.

Boxová miestnosť (box) - izolovaná miestnosť so zádverím (predbox).

Laboratórium - štrukturálna jednotka, ktorá vykonáva experimentálne a / alebo / výrobné práce s patogénnymi biologickými činidlami.

„Nákazlivá“ zóna – miestnosť alebo skupina miestností v laboratóriu, kde sa manipuluje s produkčnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty.

"Čistá" zóna - miestnosť alebo skupina laboratórnych miestností, kde sa nevykonávajú manipulácie s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty.

Výrobné práce - práca na výrobe medicínskych imunobiologických prípravkov s použitím priemyselných kmeňov fixovaného vírusu besnoty.

Fixovaný vírus besnoty* - oslabený kmeň vírusu besnoty získaný predĺženým prechodom cez mozog králika. Produkčné kmene fixovaného vírusu besnoty sú uložené v GISK nich. L.A. Tarasevich a vydávajú sa raz ročne inštitúciám, ktoré majú právo pracovať s mikroorganizmami skupín patogenity III-IV.
_______________
* Napríklad kmene fixovaného vírusu besnoty „Moskva“ a „CVS“.


OOPP - osobné ochranné prostriedky.

4. Požiadavky na organizáciu práce s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty

4.1. Všeobecné požiadavky

Práca s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty sa môže vykonávať v laboratóriách, ktoré majú predpísaným spôsobom povolenie vydané hlavným štátnym sanitárom ustanovujúcej jednotky Ruskej federácie na dobu 5 rokov. Stráca platnosť, ak sa laboratórium premiestni alebo preplánuje, a môže byť zrušené aj v prípade porušenia požiadaviek na biologickú bezpečnosť.

4.2. Požiadavky na produkčné kmene fixovaného vírusu besnoty

Expertný výbor WHO (1972) odporučil nasledujúce požiadavky na produkčné kmene fixovaného vírusu besnoty:

- starostlivá registrácia histórie prechodu;

- vykonanie vo výrobe nie viac ako 10 pasáží od poslednej kontroly biologických vlastností;

- minimálna patogénna aktivita pre laboratórne zvieratá s extraneurálnym podávaním;

- antigénna špecifickosť a imunogénna aktivita;

- štúdium vlastností produkčného kmeňa fixovaného vírusu besnoty po každých 10 pasážach.

Fixovaný vírus besnoty musí mať tieto hlavné vlastnosti:

- krátka inkubačná doba (4-5 dní);

- väčšia patogenita pre králiky s intracerebrálnou infekciou;

- výrazné oslabenie schopnosti vytvárať Negriho telá;

- spôsobiť paralytickú formu besnoty bez excitačných javov;

- akumulácia v CNS myší do 6,0-7,0 IgLD/0,03 ml;

- vysoká afinita k centrálnemu nervovému systému a nízka afinita k vnútorným orgánom.

4.3. Požiadavky na laboratórne priestory a vybavenie

4.3.1. Laboratóriá pracujúce s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty by mali byť umiestnené v samostatnej budove alebo izolovanej časti budovy so samostatným vchodom.

4.3.2. Laboratórium musí byť zabezpečené prívodom vody, kanalizácie, elektriny, kúrenia a vetrania. Všetky laboratórne priestory musia mať prirodzené a umelé osvetlenie, v závislosti od druhu práce, v súlade s požiadavkami súčasných regulačných dokumentov.

4.3.3. Laboratórne priestory by mali byť rozdelené na "infekčné" a "čisté" zóny. Plánovacie rozhodnutia a umiestnenie zariadenia by mali zabezpečiť tok propagácie produkčných kmeňov fixovaného vírusu besnoty a splnenie požiadaviek tohto pokynu.

4.3.4. Laboratórium by malo disponovať súborom pracovných miestností a ostatných priestorov vrátane sprchovacieho kúta v súlade s výrobnou kapacitou a rozsahom vykonávaných technologických operácií.

4.3.5. Vnútorná výzdoba priestorov sa musí vykonávať v súlade s funkčným účelom. Povrch podlahy, stien, stropu v laboratórnych miestnostiach "infekčnej" zóny by mal byť hladký, bez trhlín, ľahko spracovateľný, odolný voči čistiacim a dezinfekčným prostriedkom, podlahy by nemali byť šmykľavé.

4.3.6. Okná a dvere priestorov „infekčnej“ zóny laboratória musia byť vzduchotesné.

4.3.7. Existujúce odsávacie vetranie z "infekčnej" zóny laboratória by malo byť izolované od ostatných ventilačných systémov a vybavené jemnými vzduchovými filtrami. Pri použití biologických bezpečnostných skríň triedy II vybavených odsávacím ventilačným systémom s jemnými filtrami typu „Like“ je možné odsávací ventilačný systém použiť bez inštalácie filtrov.

4.3.8. Je povolené inštalovať klimatizácie v pracovných miestnostiach a boxoch. Počas práce s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty by mali byť klimatizácie vypnuté.

4.3.9. Laboratórny nábytok v „infekčnej“ oblasti by mal mať náter, ktorý je odolný voči čistiacim a dezinfekčným prostriedkom. Povrch stolov by nemal mať švy a praskliny.

4.3.10. Šírka uličiek na pracoviská alebo medzi dvoma radmi vyčnievajúcich zariadení musí byť najmenej 1,5 m (vrátane vyčnievajúcich konštrukcií).

4.3.11. Priestory, v ktorých sa pracuje s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty, musia byť vybavené baktericídnymi lampami v súlade s „Smernicami pre používanie baktericídnych lámp na dezinfekciu vnútorného vzduchu a povrchov“. Lampy sa zapnú po mokrom čistení. Vstup do priestorov je povolený až po vetraní minimálne 30 minút (pri použití bezozónových baktericídnych lámp vetranie nie je potrebné). O prevádzkovej dobe každého svietidla je potrebné viesť záznam s poznámkou v denníku.

4.3.12. Pri orientácii okien na juh je potrebné zabezpečiť ochranu pracovnej plochy pred priamym slnečným žiarením použitím svetloochranných fólií, žalúzií z materiálu odolného voči dezinfekčným prostriedkom.

4.3.13. Laboratórne priestory musia byť nepriepustné pre hlodavce a hmyz.

4.3.14. Laboratórium musí byť vybavené hasiacim zariadením.

4.4. Požiadavky na prácu v laboratóriu

4.4.1. Prácu s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty vykonávajú špecialisti s vyšším a stredným odborným vzdelaním, ktorí prešli špeciálnym školením.

4.4.2. Pracovníci môžu pracovať s produkčnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty po tom, čo boli poučení o dodržiavaní požiadaviek biologickej bezpečnosti. Následné brífingy sa uskutočňujú aspoň raz ročne so zápismi v príslušných časopisoch.

4.4.3. Prístroje, zariadenia a meracie prístroje používané pri práci laboratória musia byť certifikované, technicky spoľahlivé, včas podliehať metrologickej kontrole a mať technický pas. Pre každé zariadenie (inštaláciu) by sa mali vypracovať pravidlá (pokyny) na ich prevádzku s prihliadnutím na požiadavky biologickej bezpečnosti.

4.4.4. V laboratóriu sa musia používať schválené dezinfekčné prostriedky (3% chlóramín). Čas použiteľnosti hotového roztoku by nemal presiahnuť 15 dní.

4.4.5. V priestoroch "infekčnej" zóny laboratória sa vykonáva:

- práca so zvieratami (infekcia, pitva);

- udržiavanie infikovaných zvierat;

- dezintegrácia, homogenizácia mozgového tkaniva a iné operácie s pravdepodobnou tvorbou aerosólu;

- infekcia bunkovej kultúry;

- príprava suspenzií a suspenzií;

- práca s lyofilizovanými produkčnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty.

4.4.6. Počas práce musia byť dvere pracovných miestností zatvorené. Pred prácou sa zapne vetranie "na odtoku". Počas práce je zakázané vychádzať z pracovnej miestnosti.

4.4.7. Infekciu zvierat vykonávajú najmenej dvaja zamestnanci.

4.4.8. Pri pipetovaní používajte gumené žiarovky alebo automatické zariadenia.

4.4.9. Pred použitím riad, pipety, vybavenie, striekačky atď. musí byť skontrolovaná integrita a použiteľnosť.

4.4.10. Ampulky s lyofilizovanými priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty sa sterilne otvoria cez tácku alebo tácku s gázovým tampónom namočeným v dezinfekčnom roztoku. Horný koniec ampulky sa zahreje nad plameňom horáka, parafín sa odstráni, potom sa kúsok sterilnej vaty namočený v sterilnej vode jemne dotkne napnutého konca ampulky, aby sa vytvorila trhlina. Rovnaká mokrá vata je zakrúžkovaná okolo výlevky ampulky. Po vytvorení kruhovej (alebo nie úplne kruhovej) trhliny sa koniec ampulky prekryje gázou alebo bavlnou a odlomí sa pinzetou.

4.4.11. Po otvorení ampulky sa do nej pridá 1,0 ml sterilnej destilovanej vody a jemne sa pretrepe. Výsledná suspenzia obsahujúca fixovaný vírus besnoty sa používa na infikovanie laboratórnych zvierat.

4.4.12. Pri intracerebrálnej infekcii králika sa bezpečne fixuje na špeciálnom stroji alebo sa podáva ľahká anestézia (20-30 minút pred infekciou intramuskulárne 2-2,5 ml roztoku Rometar). Potom sa vlasy v oblasti navrhovanej injekcie opatrne vystrihnú, ošetria 70% roztokom etanolu a 5% roztokom jódu a pomocou sterilnej injekčnej striekačky s objemom 2 ml a ihly veľ. N 20: (10 x 0,90), 0,25 ml suspenzie fixovaného vírusu sa injikuje kmeň besnoty. Punkcia sa robí približne v strede línie, ktorá podmienečne spája vonkajší roh oka a ucho. Pri infekcii veľkých králikov možno použiť nerezové šidlo alebo trokar. Zjavné príznaky paralýzy sa u králikov objavujú 4. deň po inokulácii; v zriedkavých prípadoch sa vyvíjajú až 7 dní. Extrakcia mozgu sa u zvieraťa vykonáva až po vyvinutí úplného obrazu paralýzy, charakteristickej pre fixovaný vírus besnoty. Medzi prvé príznaky experimentálnej besnoty patrí horúčka, plachosť a rozšírené zreničky. Potom sú to meningeálne javy, parézy, zvyčajne začínajúce od zadných končatín, rýchlo postupujúca paralýza, zachytávanie všetkých končatín, krčných a tylových svalov.

4.4.13. Choré králiky s obrazom úplnej paralýzy, ale stále dýchajúce, sú zabité úplným vykrvácaním. Mozog sa používa na výrobu antigénu besnoty. Po dekapitácii sa koža odstráni, chrbtica sa oddelí spolu s miechou, ktoré sa podrobia autoklávovaniu (2,0 kgf / cm (0,2 MPa). 132 ± 2 ° C), ako infekčný materiál.

4.4.14. Na extrakciu mozgu sa zviera umiestni na podnos so žalúdkom nadol tak, aby hlava bola na okraji stola. Pomocou pinzety, skalpela a nožníc sa hlava oddelí od tela. Potom sa skalpuje pokožka hlavy, pričom sa odstránia uši a horné viečka. Odkrytý povrch lebky sa navlhčí 70% alkoholom a umiestni sa do kryštalizátora. Kryštalizátor sa prenesie do sterilného boxu na prípravu antigénu. Pred otvorením lebky sa dvakrát ošetrí 70% etylalkoholom. Potom sa lebka králika fixuje v špeciálnom zariadení (príloha 1), ktoré zaisťuje bezpečnú fixáciu hlavy zvieraťa. V ľavej ruke držiac sekcionálny nôž, pravou rukou pomocou kladiva sa lebka otvorí štyrmi pravouhlými rezmi. Najprv by ste mali urobiť rez pozdĺž čiary spájajúcej stred očí, potom rez v parietálnej oblasti a potom tieto dva rezy spojiť kolmými rezmi. Potom, odložením rezného noža a kladiva, sa pomocou pinzety a nožníc uvoľní dura mater a predná časť mozgu sa oddelí na úrovni čuchového laloku; prekrížte predĺženú miechu za mozočkom, zdvihnite mozog, prekrížte očnú chiasmu a potom ju preneste do sterilnej Petriho misky na váženie.

4.4.15. Na prípravu antigénu sa mozog po odvážení umiestni do sterilnej trecej misky alebo homogenizátora a rozdrví. K rozdrvenému mozgu sa pridá destilovaná voda obsahujúca 0,5 % fenolu, čím sa získa 10 % mozgová suspenzia. Mozgová suspenzia sa prefiltruje cez trojitú vrstvu gázy. Sterilita mozgovej suspenzie sa kontroluje naočkovaním na cukrový bujón, mäsovo-peptónový agar a mäsovo-peptónový bujón s 0,1 % agarom a kúskami mäsa. Plodiny sa uchovávajú pri teplote 37 °C počas 5 dní. Na imunizáciu produkčných koní je povolené použiť sterilný antigén, ktorý sa uchovával pri teplote 4 °C najviac 14 dní.

4.4.16. Na prípravu počiatočných kultúr fixovaného vírusu besnoty sa králičí mozog umiestni do sterilnej mažiare alebo homogenizátora a rozdrví. K rozdrvenému mozgu sa pridáva destilovaná voda, kým sa nezíska 10 % suspenzia mozgu. Sterilita mozgovej suspenzie sa kontroluje naočkovaním na cukrový bujón, mäsovo-peptónový agar a mäsovo-peptónový bujón s 0,1 % agarom a kúskami mäsa. Suspenzia mozgu sa sterilne naleje do alikvótov s objemom 4 až 5 ml a zmrazí sa pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C. Optimálna teplota na skladovanie fixovaných kmeňov vírusu besnoty je mínus 70 °C. Na infekciu sa jeden alikvot vyberie z mrazničky a umiestni sa do chladničky pri teplote 4 °C na 18-20 hodín.Po rozmrazení sa stredná fáza mozgovej suspenzie obsahujúca maximálne množstvo vírusu opatrne vyberie Pasteurovou pipetou.

4.4.18. Pravidlá pitvy myší. Myši sa zabíjajú v stave vážnych terminálnych symptómov besnoty chloroformom. Mŕtvola myši je upevnená na doske chrbtom hore. To si vyžaduje dva špendlíky - jeden je pripevnený k koreňu chvosta, druhý je špičkou papule. Na upevnenie predných labiek a chvosta môžete použiť tri kolíky. Po ošetrení alkoholom sa koža hlavy a krku rozreže nožnicami a pinzetami, čím sa odkryje lebka. Lebka je upnutá v očných jamkách chirurgickou pinzetou, viečko lebky je oddelené zakrivenými nožnicami, čím sa obnažuje mozog. Pomocou rovnakých zakrivených nožníc sa vyberie mozog a prenesie sa do sterilnej Petriho misky, ktorá sa vopred odváži. Petriho misky s mozgovým tkanivom sa odvážia. Potom sa mozog prenesie do sterilnej trecej misky, kde sa pomocou sterilného tĺčika s prídavkom destilovanej vody pripraví 10% suspenzia mozgu. Suspenzia sa naleje do alikvotných častí a skladuje sa pri teplote nie nižšej ako mínus 18 ° C. Optimálna teplota na uchovávanie kmeňov fixovaného vírusu besnoty je mínus 70 ° C.

4.4.19. Po ukončení prác musia byť všetky predmety s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty prevezené do skladu (chladničky, termostaty, skrine atď.); je povinné dezinfikovať pracovné plochy stolov 3% roztokom chloramínu.

4.4.20. Použité pipety sú úplne (vertikálne) ponorené do dezinfekčného roztoku (3% chloramín), čím sa zabráni tvorbe vzduchových bublín v kanáloch. Trvanie dezinfekcie 60 min.

4.4.21. Použité náčinie, pevný odpad z „infekčnej“ oblasti laboratória by sa mali zbierať do zapečatených nádob a preniesť do autoklávu alebo dezinfikovať na mieste. Vypúšťanie nedezinfikovaných kvapalín do kanalizačnej siete je zakázané.

4.4.22. Prenos produkčných kmeňov fixovaného vírusu besnoty a použitých nástrojov na dezinfekciu by sa mal vykonávať v uzavretých nádobách, ktoré vylučujú infekciu personálu počas prepravy. Po ukončení prác sú priestory „infekčnej“ zóny laboratória uzamknuté a zapečatené. Pečatenie a odstraňovanie plomb vykonávajú zamestnanci laboratória, ktorí majú povolenie vedúceho laboratória (oddelenie).

4.4.23. Imunizácia produkčných koní sa vykonáva podľa predpisov na výrobu „Tekutého imunoglobulínu proti besnote z konského krvného séra“.

4.4.24. Pravidlá pre zavedenie antigénu. Zavedenie konského antigénu sa vykonáva v špeciálne vybavenej miestnosti (operačná sála). Personál injekčne podávajúci antigén má oblečené protimorové obleky typu 3 s gumenými rukavicami. Na podanie antigénu sa používa zariadenie na hromadné inokulovanie PMP-1, ktoré je napojené cez silikónovú hadičku na ihlu a liekovku s antigénom. Celý vstrekovací systém je hermeticky uzavretý. Miesto vpichu antigénu sa vopred ošetrí 70% roztokom alkoholu. Ihla sa zavedie subkutánne a pod miernym tlakom sa pomaly vstrekne antigén. Po injekcii sa prívod antigénu zablokuje chlopňou, koža v mieste vpichu sa na 1 minútu prichytí hemostatickou pinzetou. Pinzeta sa vyberie, miesto vpichu sa ošetrí tampónom navlhčeným v 70% roztoku alkoholu a aplikuje sa tampón s kolódiom alebo furaplastom s perchlorovinylom. Po použití sa celý vstrekovací systém varí 30 minút v 2% roztoku sódy. V procese hyperimunizácie sa neustále monitoruje celkový stav a teplotná reakcia výrobcov. V prípade zvýšenia teploty sa ďalšia injekcia antigénu uskutoční po jeho znížení na normu.

4.4.25. Skladovanie priemyselných kmeňov fixovaného vírusu besnoty sa vykonáva v priestoroch infekčnej zóny. Skladovanie, účtovanie, prenos, preprava a likvidácia produkčných kmeňov fixovaného vírusu besnoty sa vykonáva v súlade s požiadavkami SP 1.2.036-95.

4.4.26. Prijímanie návštevníkov je povolené len v špeciálne vyhradených priestoroch v „čistom“ priestore laboratória.

4.4.27. Odvoz zariadenia, laboratórneho alebo domáceho skla, náradia a pod. z laboratória sa vykonáva len po ich dezinfekcii a so súhlasom jeho vedúceho.

4.4.28. V "nákazlivej" zóne laboratória je zakázané:

- odísť po skončení práce na pracovisku riad s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty "Moskva" a "CVS";

- pipetovanie ústami, prelievanie tekutého infekčného materiálu cez okraj nádoby (skúmavky, banky, liekovky);

- skladovať vrchné odevy, klobúky, topánky, dáždniky, nákupné tašky, kozmetiku atď., ako aj potraviny;

- fajčiť, piť vodu;

- ponechať pracovisko bez dozoru pri vykonávaní akéhokoľvek druhu práce s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty;

- vylejte tekutý odpad (infikované kvapaliny, testovaný materiál a pod.) do kanalizácie bez predchádzajúcej dezinfekcie.

4.4.29. Je povolené vykonávať experimentálne a výrobné práce s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty v tej istej miestnosti. Experimentálna a produkčná práca by mali byť časovo oddelené. Experimentálny materiál by sa mal skladovať oddelene od výrobného materiálu v chladničke alebo termostate špeciálne na to určenom.

4.4.30. Všetci zamestnanci pracujúci s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty musia byť pod dispenzárnym dohľadom. Pravidelné lekárske prehliadky sa vykonávajú v súlade s aktuálnymi nariadeniami (N 280/88 - Ministerstvo zdravotníctva a lekárskeho priemyslu a Štátny výbor pre sanitárny a epidemiologický dohľad Ruska).

4.5. Požiadavky na používanie osobných ochranných prostriedkov (OOP)

4.5.1. Pracovníci laboratória by mali mať podľa charakteru vykonávanej práce a v súlade s platnými normami k dispozícii lekárske plášte, pyžamá (montérky), čiapky, snímateľnú obuv a iné osobné ochranné prostriedky.

4.5.2. Pracovný odev a obuv musia byť individuálne, musia zodpovedať veľkosti pracovníka a musia byť uložené oddelene od osobného oblečenia.

4.5.3. Pri výskume v boxových miestnostiach sa lekársky plášť mení na protimorový alebo chirurgický, siahajúci do dolnej tretiny predkolenia. Okrem toho sa používajú gumené rukavice, papuče a v prípade potreby respirátory (masky). Operácie, ktoré si vyžadujú otvorenie lebky a chrbtice, sa musia vykonávať v gumených rukaviciach, okuliaroch a protimorových plášťoch. Je tiež potrebné nosiť gumené alebo odolné polyetylénové zástery, ktoré sa dajú ľahko dezinfikovať alebo zničiť.

4.5.4. Pracovný odev by sa mal meniť, keď sa zašpiní, najmenej však raz týždenne.

4.5.5. Ochranný odev by mal byť pred praním dekontaminovaný namáčaním v 1% roztoku chlóramínu.

4.6. Požiadavky na dezinfekciu materiálu a čistenie priestorov

4.6.1. Dezinfekcia rôznych predmetov pri práci s priemyselnými kmeňmi fixovaného vírusu besnoty sa vykonáva v súlade s povahou objektu, ktorý sa má dezinfikovať.

Tabuľka

Besnota(lat. Besnota, Lyssa, Hydrofóbia) je oddávna známa ako choroba divých a domácich zvierat. Vírus besnoty selektívne ovplyvňuje bunky centrálneho nervového systému, takže ochorenie sprevádza vzrušenie, kŕče a potom dochádza k paralýze.

Morfológia a biologické vlastnosti. Vírus besnoty je tyčinkovitý, veľký 100-150 nm, pokrytý škrupinou. V cytoplazme postihnutých buniek tvorí inklúzie, ktoré v roku 1892 opísal Babesh, v roku 1903 Negri. Nazývajú sa telá Babesh-Negri. Tvar inklúzií je guľovitý, veľkosť 1–20 µm, podľa Romanovského sú natreté červenou farbou. Ich detekcia v bunkách amónneho rohu má diagnostickú hodnotu.

Vírus sa kultivuje v mozgovom tkanive myšacieho embrya, keď je infikovaný v žĺtkovom vaku alebo mozgu kuracích embryí, a tiež v tele králika.

Existujú dva typy vírusu besnoty: pouličný vírus, ktorý je izolovaný od chorých ľudí a zvierat, a fixný vírus získaný Pasteurom počas dlhých prechodov pouličného vírusu cez mozog králika (fixný vírus). Fixný vírus spôsobuje paralýzu, keď je infikovaný králikmi počas prísne fixnej, skrátenej inkubačnej doby 3-7 dní. Je nepatogénny pre ľudí, psov a iné zvieratá, nevylučuje sa v slinách zvierat a ľudí, zriedka sa nachádza v periférnych nervoch a netvorí telieska Babes-Negri. Fixovaný vírus, ktorý stratil svoju virulenciu pre ľudské zviera, sa používa pri výrobe vakcín proti besnote. V mechanizme imunity, ktorý nastáva po zavedení vakcín proti besnote, má najväčší význam fenomén interferencie vírusov. Podstata tohto javu spočíva v schopnosti jedného typu vírusu, ktorý napadol hostiteľskú bunku, oddialiť reprodukciu iného typu vírusu, ktorý sa do tej istej bunky dostal neskôr. Fixovaný vírus, ktorý má vysokú afinitu k nervovému tkanivu, sa v ňom rýchlo množí a zabraňuje rozvoju pouličného vírusu.

Udržateľnosť. Vírus besnoty je vo vonkajšom prostredí nestabilný: pri zahriatí, pôsobením slnečného žiarenia a dezinfekčných prostriedkov (formalín, fenol, sublimát) rýchlo odumiera. V 50% glyceríne sa môže skladovať pri -20-40°C niekoľko rokov.

Patogenita. Na vírus pouličnej besnoty sú vnímavé všetky teplokrvné voľne žijúce a domáce zvieratá a v menšej miere aj vtáky. Paralytické formy besnoty sa vyskytujú u laboratórnych zvierat (králiky, biele myši, morčatá) rôznymi cestami infekcie.

Patogenéza a klinika. Vírus besnoty sa do ľudského tela dostáva slinami pri uhryznutí besnými zvieratami alebo slinami ľudskej kože chorými zvieratami. Prostredníctvom kmeňov periférnych nervov sa vírus dostane do centrálneho nervového systému a infikuje ho. Inkubačná doba besnoty často trvá od 1 do 3 mesiacov a závisí od miesta uhryznutia. Pri uhryznutí tváre a krku je obdobie kratšie (od 10 dní do roka). Choroba začína objavením sa bolesti v mieste uhryznutia, pocitom strachu, úzkosti, podráždenosti. Pri pokuse o naliatie a už pri pohľade na vodu sa objavujú svalové kŕče pri prehĺtaní, preto sa ochorenie besnoty nazýva besnota, čiže hydrofóbia. Pacient je vzrušený, vedomie je narušené, pozorujú sa konvulzívne záchvaty. Pacienti môžu uhryznúť, ponáhľať sa k zdravotníckemu personálu. Po niekoľkých dňoch nastáva ochrnutie svalov končatín, tváre, dýchacích svalov a smrť. Trvanie ochorenia je 6-7 dní.

Virologická diagnostika. Metódy in vivo indikácie vírusu besnoty neboli vyvinuté. Diagnóza sa stanovuje na základe typického klinického obrazu ochorenia. Po smrti sa v postihnutých mozgových bunkách nachádzajú telá Babesh-Negri. Špecifický antigén možno detegovať aj metódou fluorescenčných protilátok. Vírus možno izolovať infikovaním laboratórnych zvierat: králikov, bielych myší a morčiat, po otvorení ktorých sa v bunkách postihnutého mozgu nachádzajú inklúzie Babesh-Negri.

Prevencia a liečba. Na účely špecifickej profylaxie sa podáva vakcína proti besnote, ktorú ako prvý navrhol Pasteur. Vakcíny sa pripravujú zo suspenzie mozgového tkaniva králikov, oviec alebo dojčiacich bielych potkanov infikovaných fixovaným vírusom besnoty. Existujú rôzne typy vakcín, ktoré sa líšia množstvom a kvalitou konzervačných látok. Vakcína Fermi obsahuje 1 % fenolu, vakcína Semple obsahuje 0,25 % fenolu a vakcína Phillips obsahuje glycerol. V posledných rokoch bola navrhnutá živá vakcína proti besnote z vírusu, ktorý sa kultivuje na vtáčích embryách (Vakcína Fleury). Pôsobenie vakcíny je založené na fenoméne interferencie vírusov. Všetci ľudia pohryznutí alebo olíznutí chorými alebo podozrivými zvieratami na besnotu podliehajú očkovaniu. Neexistujú žiadne kontraindikácie pre použitie vakcíny, pretože je to jediný spôsob, ako zachrániť infikovaných. Zvyčajne sa očkovanie vykonáva opakovane počas 12-30 dní alebo dlhšie, v závislosti od závažnosti uhryznutia, jeho lokalizácie a času, ktorý uplynul po uhryznutí. Vakcína sa podáva subkutánnou injekciou do brucha.

Očkovanie by sa malo začať čo najskôr po uhryznutí a malo by sa vykonať podľa existujúcich pokynov. Imunita, ktorá vzniká po očkovaní, trvá až 6 mesiacov. Ľudia s výskytom príznakov ochorenia nie sú očkovaní. Pri silnom uhryznutí do hlavy a krku sa súčasne s vakcínou proti besnote podáva gamaglobulín alebo sérum proti besnote. Podozrivé zvieratá sa pozorujú 7 dní a ak sa nepozorujú žiadne príznaky choroby, považujú sa za zdravé. Neexistujú žiadne účinné spôsoby liečby besnoty.