A vírus és a sejt közötti kölcsönhatás típusai. A vírus-sejt kölcsönhatás produktív típusa

A virion és az élő sejt kölcsönhatása több szakaszban történik.

BAN BEN kezdeti (előkészítő) időszak A virion a sejthez kapcsolódik, behatol abba, majd a virion fehérjehéja elpusztul, felszabadítva a nukleinsavat.

Eljövetel rejtett (látens) időszak vírusfertőzés, melynek során a vírusrészecskék jelenléte a fertőzött sejtben semmilyen módszerrel nem mutatható ki - a szülő virion eltűnni látszik. Ebben az időszakban a sejtbe bejutott vírusnukleinsav megszervezi az utódok víruskomponenseinek szintézisét, a gazdaszervezet enzimrendszerét felhasználva erre a célra. A szaporodási ciklus a leányvirionok képződésével és a sejtből való felszabadulásával ér véget. végső időszak ).

Az egyszerűbb baktériumok nem képesek maguk megragadni a részecskéket a környezetből. Ezért a bakteriofágok speciális eszközök a sűrű baktériumfal leküzdésére. A farok vége egy speciális enzimet tartalmaz, amely feloldja a baktérium membránját. Ezután a farok mikroszkopikus „izmai” összehúzódnak, és a fág nukleinsavat „injektálják” a sejtbe, mintha fecskendővel injektálták volna.

Ennek eredményeként a fág fehérjebevonata a sejt felszínén marad, és csak a nukleinsav jut be a sejtbe.

A vírusok nukleinsavai olyan programot hajtanak végre, amellyel új vírus utódokat hoznak létre a sejtben. Ezt eredeti kísérletek igazolták. Lehetőség volt a vírusokat alkotóelemeikre - fehérjékre és nukleinsavakra - szétválasztani. Kiderült, hogy a sejtfertőzés és a vírusszaporodás csak azután következett be, hogy vírusos nukleinsavat adtak a sejtekhez. Más szóval, a vírusok nukleinsavai maguk is előidézhetik a vírusok szaporodását, azaz fertőző tulajdonságokkal rendelkeznek. Egy másik kísérletben két vírust alkotó komponensekre különítettek el, majd „felöltöztették”: az egyik vírus nukleinsavát „beöltözték” a másik héjába. A létrejövő hibridek megfertőzték az érzékeny sejteket. Felfedezték, hogy mindkét „álcázott” vírus képes szaporodni, és a létrejövő utódok mindig hasonlóak ahhoz a vírushoz, amelynek nukleinsavát a hibrid tartalmazta.

A sejtbe bejutott vírusnukleinsav szabályozza a vírusszaporodás minden folyamatát. Először is, a sejtet úgynevezett korai fehérjék szintézisére kényszeríti, amelyek elnyomják a sejt saját anyagcseréjét és biztosítják a leányrészecskék nukleinsavainak szintézisét. Kialakulásuk a kiindulási nukleinsav önmásolásának eredményeként következik be. A vírus nukleinsavában található genetikai információ határozza meg azoknak a fehérjéknek az összetételét, amelyekből az úgynevezett késői fehérjék leányrészecskéi épülnek fel. A DNS-tartalmú vírusokban ez az információ a sejtnél megszokott módon valósul meg: a DNS-en információs RNS (transzkripció) szintetizálódik, amely a fehérjék későbbi bioszintézisét (transzlációt) szabályozza. Számos RNS-tartalmú vírus nukleinsava egyesíti a genetikai és információs funkciókat: az RNS mind a replikációban, mind a transzlációban (a nukleinsavak és a vírusfehérje szaporodásában) részt vesz. Sok vírusban a fehérjehéj és a belső tartalom felépítése külön-külön történik. A sejt „felhalmoz” egyes részeket, amelyek aztán egyesülve vírusrészecskéket képeznek. Amikor egy fertőzött sejtben elegendő számú „üres” halmozódik fel a jövőbeli vírusrészecskék számára, megkezdődik az alkatrészek egyfajta összeállítása (összetétel). Ez a folyamat általában a sejtmembrán közelében megy végbe, amely részt vesz benne. A vírusrészecske gyakran tartalmaz olyan anyagokat, amelyek

jellemző arra a sejtre, amelyben a vírus szaporodik. Például az influenzavírus esetében a vírusrészecske képződésének végső szakasza egyfajta sejtmembránréteggel burkolja be. Vagyis a sejt nem csak „eteti” és „öntözi” a vírust, hanem „búcsút is öltöztet”. A vírus és a sejt közötti interakció utolsó szakasza általában rövid életű. Az így létrejövő teljes értékű vírusrészecskék gyorsan kijutnak a külső környezetbe. Az utódok bakteriofágokban való termelése nagyon egyedi módon történik. Általában a baktériumsejtek feloldódásával (lízisével) jár együtt egy speciális enzim hatására, amely a fág szaporodásával párhuzamosan felhalmozódik a sejtben, és elpusztulásához és elpusztulásához vezet. Mikroszkóp alatt jól látható, hogyan történik ez. Néha úgy tűnik, hogy a baktérium felrobban, máskor lyuk képződik a baktériumban (a közepén vagy az egyik végén), amelyen keresztül a tartalma kifolyik. Egy elpusztult baktériumból akár több száz új fágrészecske is felszabadulhat. A fág szaporodási folyamata addig tart, amíg az erre a fágra érzékeny baktériumok el nem pusztulnak. A himlő-, gyermekbénulás- és agyvelőgyulladás vírusokra is jellemző, hogy több száz, esetenként több ezer leányvirion gyorsan kerül a környezetbe. Más emberi és állati vírusok (herpesz vírus, mumpsz vírus, reovírus) érésük során elhagyják a sejteket. Ezeknek a vírusoknak több szaporodási ciklust sikerül végrehajtaniuk, mielőtt a sejtek elpusztulnának, fokozatosan kimerítve a sejtek szintetikus erőforrásait és pusztulásukat okozva. Egyes esetekben a V. felhalmozódhat a sejtek belsejében, kristályszerű klasztereket képezve (V. rabies, adenovírusok stb.), amelyeket zárványtesteknek nevezünk.

Influenza, veszettség, psittacosis, himlő esetén ilyen testek találhatók a sejtek citoplazmájában, tavaszi-nyári agyvelőgyulladás, sárgaláz, herpesz és gyermekbénulás esetén - a sejtmagban; Egyes fertőzésekben zárványtesteket találtak a sejtmagban és a citoplazmában is. Az elmúlt évek kutatásai kimutatták, hogy ezek a zárványok az esetek túlnyomó többségében a vírus kolóniái, és kialakulásuk természetes a fertőző ágensek szaporodásának egy bizonyos szakaszában. Az intracelluláris zárványok nagy specifitása vírusos betegségekben lehetővé teszi ennek a jelnek a diagnosztizálására történő használatát. Például az agy idegsejtjeiben található citoplazmazárványok (ún. Negri testek) a veszettség fő bizonyítékai, a hámsejtekben található specifikus kerek vagy ovális képződmények (ún. Guarnieri testek) pedig himlőre utalnak. A zárványokat agyvelőgyulladásban, gerincbénulásban, ragadós száj- és körömfájásban és más betegségekben is leírták. A növényi vírusok nagyon sajátos zárványokat képeznek, amelyek kristályos formájúak. Vagyis a vírusok szaporodása különleges, összehasonlíthatatlan módon történik. Először a vírusrészecskék behatolnak a sejtekbe, és vírusnukleinsavak szabadulnak fel. Ezután elkészítik a jövőbeli vírusrészecskék részleteit. A szaporodás az új vírusrészecskék összerakásával és a környezetbe való kibocsátásával ér véget. Ezen stádiumok bármelyikének elvesztése a normál ciklus megzavarásához vezet, és vagy a V. szaporodás teljes elnyomásával, vagy alacsonyabb rendű utódok megjelenésével jár.

A vírus és a gazdasejt közötti interakció fő szakaszai.

1. Adszorpció - kiváltó mechanizmus, amely a vírus és a gazdaszervezet specifikus receptorainak kölcsönhatásával kapcsolatos (influenzavírusban - hemagglutinin, humán immunhiányos vírusban - glikoprotein gp 120).

2. Behatolás - a szuperkapszid fúziójával a sejtmembránnal vagy endocitózissal (pinocitózissal).

3. Nukleinsav felszabadulás - ―a nukleokapszid levetkőzése és a nukleinsav aktiválása.

4. Nukleinsavak és vírusfehérjék szintézise , azaz a gazdasejtrendszerek alárendeltsége és a vírus szaporodása érdekében végzett munkájuk.

5. Virion összeállítás - a vírus nukleinsav replikált másolatainak asszociációja kapszid fehérjével.

6. A vírusrészecskék kilépése a sejtből , szuperkapszid megszerzése burkolt vírusok által.

A vírusfertőzés formái.

A makroorganizmus szintjén a vírusos elváltozások fő formái alapvetően nem különböznek azoktól, amelyeket akkor észleltek, amikor az egyes sejteket vírusok fertőzik meg.

Produktív vírusfertőzés leánypopulációk kialakulásával és jellegzetes klinikai megnyilvánulásaival csak akkor lehetséges, ha a fertőzött szervezetben vannak érzékeny sejtek, amelyekben a kórokozó szaporodási ciklusa végbemegy. Például a gyermekbénulás kórokozója csak a főemlősök és az emberek gyomor-bél traktusának és központi idegrendszerének sejtjeiben képes szaporodni.

Abortusz fertőzés akkor alakul ki, amikor a kórokozó behatol az érzéketlen sejtekbe (például amikor a szarvasmarha leukémia vírusa bejut az emberi szervezetbe), vagy olyan sejtekbe, amelyek nem képesek teljes szaporodási ciklust biztosítani (például a sejtciklus G0 szakaszában lévőkbe). A sejtek azon képessége, hogy fenntartsák a vírusspecifikus szaporodási folyamatokat, az IFN-t is elnyomja, amelynek vírusellenes hatása a vírusok széles skálája ellen irányul.

Tartós vírusfertőzés A vírus és a fertőzött sejt közötti ilyen interakció során következik be, amikor az utóbbi továbbra is ellátja saját sejtfunkcióit. Ha a fertőzött sejtek osztódnak, fertőzött klón képződik. Így a fertőzött sejtek számának növekedése hozzájárul a kórokozó teljes populációjának növekedéséhez a szervezetben. A tartós vírusfertőzések azonban általában károsítják a sejtfunkciókat, ami végül klinikai megnyilvánulásokhoz vezet. Emberben a tartós fertőzések kialakulása bizonyos mértékig az életkortól függ. Például a rubeola kanyaróvírussal vagy a citomegalovírussal (CMV) való méhen belüli fertőzés a kórokozó időben korlátozott fennmaradásához vezet. A tünetek megjelenése összefügg a magzat azon képességével, hogy immunválaszt alakítson ki a fertőző ágensre.

Lappangó (rejtett) vírusfertőzés . Míg a perzisztáló fertőzéseket a leányvíruspopulációk állandó felszabadulása kíséri, addig látens elváltozásokban szórványosan alakulnak ki. Az ilyen kórokozók szaporodási ciklusa a későbbi szakaszokban élesen lelassul, és különböző tényezők hatására aktiválódik.

A látens fertőzések a legtöbb herpeszvírusra jellemzőek, visszatérő és általában nem progresszív betegségeket okoznak.

Nem megfelelő fertőzések *a lat. in-, tagadás, + appareo, be+ kíséri a kórokozó kis mennyiségének tünetmentes keringését az egyes szervekben. Ebben az esetben a kórokozót csak speciális módszerekkel lehet azonosítani. Ami az ilyen elváltozásokat megkülönbözteti a tünetmentes hordozástól, az a klinikai megnyilvánulások nagy valószínűsége. Ezt a kifejezést számos olyan fertőzésre használják, amelyekben nincsenek nyilvánvaló betegségek jelei. Az emberek vírusos fertőzéseinek gyakorlatában gyakran használják a „szubklinikai fertőzés” alternatív kifejezést. A látens fertőzések tulajdonképpen krónikusan előforduló készüléken belüli fertőzéseknek tekinthetők, amelyekben a szervezet és a kórokozó között kialakul az egyensúly.

Alvó (kriptogén) vírusfertőzés - a vírusfertőzés megnyilvánulási formája, amelyben a kórokozó inaktív állapotban van különálló gócokban (például az ideg ganglionokban). Klinikailag a fertőzés csak akkor nyilvánul meg, ha a szervezet védekezőképessége élesen gyengül. Például a 3-as típusú herpeszvírus, amely a kezdeti fertőzés során bárányhimlőt okoz, egy életen át megmarad a szervezetben. A betegség herpes zoster formájában történő megismétlődése csak károsodott immunitás esetén lehetséges (leggyakrabban idős korban).

Lassú vírusfertőzések hosszú lappangási idő (hónapok és évek) jellemzi, amely alatt a kórokozó elszaporodik, egyre nyilvánvalóbb szövetkárosodást okozva. A kórokozó kezdetben a sejtek korlátozott csoportjában szaporodik, de fokozatosan egyre nagyobb számban fertőződik meg. A betegségek súlyos elváltozások kialakulásával és a beteg halálával végződnek. A lassú vírusfertőzések közé tartozik a szubakut szklerotizáló panencephalitis, a HIV-fertőzés stb.

№ 19 A vírus-sejt kölcsönhatás típusai. A vírusszaporodás szakaszai.
A vírus-sejt kölcsönhatás típusai. A vírus és a sejt között háromféle kölcsönhatás létezik: produktív, abortív és integratív.
Termelő típus- a virionok új generációjának kialakulásával és a fertőzött sejtek elpusztulásával (lízisével) végződik (citolitikus forma). Egyes vírusok anélkül hagyják el a sejteket, hogy elpusztítanák azokat (nem citolitikus forma).
Abortív típus- nem ér véget új virionok képződésével, mivel a sejtben a fertőző folyamat az egyik szakaszban megszakad.
Integratív típus, vagy virogenitás- a virális DNS beépülése (integrációja) provírus formájában a sejtkromoszómába és ezek együttes együttélése (közös replikációja) jellemzi.
Vírusok szaporodásatöbb szakaszban hajtják végre, egymást követően felváltva: a vírus adszorpciója a sejten; a vírus behatolása a sejtbe; a vírus „levetkőzése”; víruskomponensek bioszintézise a sejtben; vírusok kialakulása; vírusok felszabadulása a sejtből.
Adszorpció.A vírus és a sejt kölcsönhatása az adszorpciós folyamattal kezdődik, vagyis a vírusoknak a sejtfelszínhez való kötődésével. Ez egy nagyon specifikus folyamat. A vírus a sejtmembrán bizonyos területein – az úgynevezett receptorokon – adszorbeálódik. A sejtreceptorok eltérő kémiai természetűek lehetnek, fehérjéket, fehérjék szénhidrát komponenseit és lipideket, lipideket képviselnek. A specifikus receptorok száma egy sejt felszínén 10 4 és 10 5 között van. Következésképpen több tíz, sőt több száz vírusrészecskék adszorbeálódhatnak a sejten.
Behatolás a sejtbe. Az állati vírusok kétféleképpen juthatnak be a sejtbe: viropexia és a vírusburok fúziója a sejtmembránnal. Viropexis esetén a vírusok adszorpciója után a sejtmembrán egy szakaszának invaginációja (invaginációja) és egy vírusrészecskét tartalmazó intracelluláris vakuólum képződése következik be. A vírust tartalmazó vakuólum bármilyen irányban eljuthat a citoplazma vagy a sejtmag különböző részeibe. A fúziós folyamatot a kapszid vagy szuperkapszid héj egyik felszíni virális fehérjéje hajtja végre. Nyilvánvalóan a vírus sejtbe való behatolásának mindkét mechanizmusa nem zárja ki, hanem kiegészíti egymást.
"Szalag".A „vetkőzés” folyamata magában foglalja a vírusvédő héjak eltávolítását és a vírus belső komponensének felszabadítását, ami fertőző folyamatot okozhat. A vírusok „levetkőzése” fokozatosan, több lépcsőben, a sejt citoplazmájának vagy sejtmagjának bizonyos területein megy végbe, amelyhez a sejt speciális enzimkészletet használ. Abban az esetben, ha a vírus behatolása a vírusburok és a sejtmembrán fúziójával történik, a vírus sejtbe való behatolásának folyamata kombinálódik a „levetkőzés” első szakaszával. A "vetkőzés" végtermékei a vírus magja, nukleokapszidja vagy nukleinsavai.
Víruskomponensek bioszintézise. A sejtbe bejutott vírusos nukleinsav olyan genetikai információt hordoz, amely sikeresen versenyez a sejt genetikai információjával. Dezorganizálja a sejtrendszerek működését, elnyomja a sejt saját anyagcseréjét, és új vírusfehérjék és nukleinsavak szintézisére kényszeríti, amelyek a vírus utódainak felépítésére szolgálnak.
A vírus genetikai információinak megvalósítása a transzkripciós, transzlációs és replikációs folyamatoknak megfelelően történik.
Vírusok képződése (gyülekezése). A szintetizált virális nukleinsavak és fehérjék képesek specifikusan „felismerni” egymást, és ha koncentrációjuk megfelelő, akkor hidrofób, só- és hidrogénkötések eredményeként spontán egyesülnek.
A különböző szerkezetű vírusok összeállítására a következő általános elvek vonatkoznak:
1. A vírusok képződése többlépcsős folyamat, közbenső formák kialakulásával;
2. Az egyszerűen elrendezett vírusok összeállítása magában foglalja a virális nukleinsavmolekulák és a kapszidfehérjék közötti kölcsönhatást, valamint nukleokapszidok (például poliovírusok) képződését. A komplex vírusokban először nukleokapszidok képződnek, amelyekkel a szuperkapszid héjfehérjék kölcsönhatásba lépnek (például influenzavírusok);
3. A vírusok képződése nem az intracelluláris folyadékban, hanem a sejt nukleáris vagy citoplazmatikus membránján történik;
4. A komplexen szerveződő vírusok a képződés során a gazdasejt összetevőit (lipideket, szénhidrátokat) tartalmazzák.
A vírusok kilépése a sejtből. A vírus utódainak a sejtből való kibocsátásának két fő típusa van. Az első típust - robbanékony - nagyszámú vírus egyidejű felszabadulása jellemzi. Ebben az esetben a sejt gyorsan elpusztul. Ez a kilépési módszer azokra a vírusokra jellemző, amelyek nem rendelkeznek szuperkapszid héjjal. A második típus a bimbózó. Azokra a vírusokra jellemző, amelyeknek szuperkapszid héja van. Az összeszerelés utolsó szakaszában a komplex vírusok nukleokapszidjai a sejtplazmamembránon rögzülnek, vírusfehérjékkel módosulnak, és fokozatosan kiemelik azt. A kitüremkedés hatására nukleokapszidot tartalmazó „rügy” keletkezik. Ezután a „rügyet” elválasztják a sejttől. Így ezeknek a vírusoknak a külső héja akkor keletkezik, amikor kilépnek a sejtből. Ezzel a mechanizmussal egy sejt hosszú ideig képes vírust termelni, így vagy olyan mértékben megőrzi alapvető funkcióit.
A vírusszaporodás teljes ciklusának befejezéséhez szükséges idő 5-6 órától (influenzavírusok, himlő stb.) több napig (kanyaróvírusok, adenovírusok stb.) terjed. A létrejövő vírusok képesek új sejteket megfertőzni, és bennük a fent említett szaporodási cikluson mennek keresztül.

A vírus szaporodási folyamata 2 fázisra osztható . Az első szakasz 3 szakaszból áll 1) a vírus adszorpciója érzékeny sejteken; 2) a vírus behatolása a sejtbe; 3) a vírus fehérjementesítése . A második fázis a vírusgenom megvalósításának szakaszait tartalmazza: 1) transzkripció, 2) transzláció, 3) replikáció, 4) vírusrészecskék összeállítása, érése és 5) vírus kilépése a sejtből.

A vírus és a sejt kölcsönhatása az adszorpciós folyamattal kezdődik, vagyis a vírusnak a sejtfelszínhez való kötődésével.

Adszorpció a virion fehérje (antireceptor) specifikus kötődése a sejtfelszín komplementer szerkezetéhez - a sejtreceptorhoz. Kémiai természetük szerint azok a receptorok, amelyeken a vírusok rögzülnek, két csoportba tartoznak: mukoprotein és lipoprotein. Az influenzavírusok, a parainfluenza és az adenovírusok a mukoprotein receptorokon rögzülnek. Az enterovírusok, herpeszvírusok, arbovírusok a sejt lipoprotein receptorain adszorbeálódnak. Az adszorpció csak bizonyos elektrolitok, különösen a Ca2+ ionok jelenlétében történik, amelyek semlegesítik a vírus és a sejtfelszín túlzott anionos töltéseit, és csökkentik az elektrosztatikus taszítást. A vírusok adszorpciója nem specifikus pozitív és negatív töltésű struktúrák elektrosztatikus kölcsönhatásának eredménye a felszíni víruson és sejten, majd specifikus kölcsönhatás lép fel a virionkötő fehérje és a sejt plazmamembránján lévő specifikus csoportok között. Az egyszerű emberi és állati vírusok a kapszid részeként kapcsolódási fehérjéket tartalmaznak. A komplex vírusokban a kapcsolódási fehérjék a szuperkapszid részét képezik. Lehetnek filamentumok (rostok az adenovírusokban), vagy tüskék, gombaszerű struktúrák myxo-, retro-, rabdo- és más vírusokban. Kezdetben a virion egyetlen kapcsolata jön létre a receptorral - ez a kötődés törékeny - az adszorpció reverzibilis. Az irreverzibilis adszorpció létrejöttéhez többszörös kapcsolatnak kell megjelennie a vírusreceptor és a sejtreceptor között, azaz stabil többértékű kötődésnek kell lennie. Egy sejt felszínén a specifikus receptorok száma 10 4 - 10 5. Egyes vírusok, például arbovírusok receptorai. a gerincesek és a gerinctelenek sejtjein egyaránt megtalálhatók, más vírusok esetében csak egy vagy több faj sejtjein.

Az emberi és állati vírusok sejtekbe való behatolása kétféleképpen történik: 1) viropexis (pinocytosis); 2) a vírus szuperkapszid héjának fúziója a sejtmembránnal. A bakteriofágoknak saját behatolási mechanizmusuk van, az úgynevezett fecskendő, amikor a fág fehérjefüggelékének összehúzódása következtében a nukleinsavat a sejtbe fecskendezik.

A vírus fehérjementesítése, a vírushemom felszabadulása a vírusvédő héjakból vagy vírusenzimek segítségével, vagy sejtenzimek segítségével történik. A fehérjementesítés végtermékei nukleinsavak vagy a belső vírusfehérjéhez kapcsolódó nukleinsavak. Ezután a vírusszaporodás második fázisa következik be, amely a víruskomponensek szintéziséhez vezet.

A transzkripció egy vírus DNS-éből vagy RNS-éből származó információk mRNS-be történő átírása a genetikai kód törvényei szerint.

A transzláció az a folyamat, amikor az mRNS-ben lévő genetikai információt egy meghatározott aminosavszekvenciává alakítják át.

A replikáció a vírusgenommal homológ nukleinsavmolekulák szintézisének folyamata.

A genetikai információ megvalósítása a DNS-tartalmú vírusokban ugyanaz, mint a sejtekben:

DNS-transzkripciós i-RNS transzlációs fehérje

RNS-transzkripciós i-RNS transzlációs fehérje

A pozitív RNS genommal rendelkező vírusok (togavírusok, picornavírusok) nem rendelkeznek transzkripcióval:

RNS transzlációs fehérje

A retrovírusok egyedülálló módon továbbítják a genetikai információkat:

RNS reverz transzkripció DNS transzkripció mRNS transzlációs fehérje

A DNS integrálódik a gazdasejt (provírus) genomjával.

Miután a sejt felhalmozta a víruskomponenseket, megkezdődik a vírusszaporodás utolsó szakasza: a vírusrészecskék összerakása és a virionok felszabadulása a sejtből. A virionok kétféleképpen lépnek ki a sejtből: 1) a sejt „felrobbanásával”, aminek következtében a sejt elpusztul. Ez az út az egyszerű vírusok (picorna-, reo-, papova- és adenovírusok) velejárója, 2) bimbózással távoznak a sejtekből. A szuperkapszidot tartalmazó vírusok velejárója. Ezzel a módszerrel a sejt nem pusztul el azonnal, és több vírusutódot is képes hozni, amíg erőforrásai ki nem merülnek.

Vírustenyésztési módszerek

A vírusok laboratóriumi körülmények között történő tenyésztéséhez a következő élő tárgyakat használják: 1) sejtkultúrák (szövetek, szervek); 2) csirkeembriók; 3) laboratóriumi állatok.

Sejttenyésztés

A legelterjedtebbek az egyrétegű sejttenyészetek, amelyek 1) primer (elsősorban tripszinezett), 2) félfolyamatos (diploid) és 3) folyamatos sejtkultúrákra oszthatók.

Eredet szerint embrionális, daganatos és kifejlett organizmusok csoportjába sorolhatók; morfogenezis útján- fibroblasztikus, epiteliális stb.

Elsődleges A sejttenyészetek bármely emberi vagy állati szövet sejtjei, amelyek képesek egyrétegű formában növekedni speciális tápközeggel bevont műanyag vagy üvegfelületen. Az ilyen növények élettartama korlátozott. Minden konkrét esetben mechanikai őrlés, proteolitikus enzimes kezelés és a sejtek számának standardizálása után nyerik ki a szövetből. A majomvesékből, humán embrionális vesékből, emberi amnionból és csirkeembriókból nyert primer tenyészeteket széles körben használják vírusok izolálására és felhalmozására, valamint vírusvakcinák előállítására.

Félbőr (vagy diploid ) sejtkultúrák - azonos típusú sejtek, amelyek akár 50-100 átoltást is képesek ellenállni in vitro, miközben megtartják eredeti diploid kromoszómakészletüket. A humán embrionális fibroblasztok diplomid törzseit vírusfertőzések diagnosztizálására és vírusvakcinák előállítására egyaránt használják.

Folyamatos sejtvonalakat potenciális halhatatlanság és heteroploid kariotípus jellemzi.

A transzplantálható vonalak forrása lehet primer sejtkultúra (például SOC, PES, BHK-21 - egynapos szír hörcsög veséjéből; PMS - tengerimalac veséjéből stb.) amelyek in vitro végtelen szaporodási tendenciát mutatnak. A sejtekből az ilyen tulajdonságok megjelenéséhez vezető változások halmazát transzformációnak, a folyamatos szövettenyészetek sejtjeit pedig transzformáltnak nevezzük.

A transzplantálható sejtvonalak másik forrása a rosszindulatú daganatok. Ebben az esetben a sejttranszformáció in vivo történik. A virológiai gyakorlatban leggyakrabban az alábbi transzplantált sejtvonalakat használják: HeLa - méhnyakrákból nyert; Ner-2 - gégerákból; Detroit-6 - a tüdőrák áttétből a csontvelőbe; RH - emberi veséből.

A sejttenyésztéshez táptalajokra van szükség, amelyeket rendeltetésük szerint növesztő és támogató táptalajokra osztanak. A táptalajnak több tápanyagot kell tartalmaznia, hogy biztosítsa az aktív sejtproliferációt, hogy egyrétegű réteget képezzenek. A támogató tápközegnek csak azt kell biztosítania, hogy a sejtek életben maradjanak a már kialakult egyrétegű vírusok sejtben történő szaporodása során.

A szabványos szintetikus médiát, például a szintetikus médiát 199 és az Eagle-féle médiát széles körben használják. A céltól függetlenül minden sejttenyésztő tápközeget kiegyensúlyozott sóoldat felhasználásával állítanak elő. Leggyakrabban Hanks megoldás. A legtöbb táptalaj szerves összetevője az állati vérszérum (borjú, szarvasmarha, ló), amelynek 5-10%-a nélkül nem megy végbe a sejtszaporodás és az egyrétegű képződés. A szérum nem része a karbantartó közegnek.

Vírusok izolálása sejttenyészetekben és indikációjuk módszerei.

A vírusok különböző fertőző anyagokból (vér, vizelet, széklet, nyálkahártya-váladék, szervmosások) izolálásakor olyan sejttenyészeteket használnak, amelyek a legérzékenyebbek a gyanús vírusra. A fertőzéshez jól fejlett egyrétegű sejteket tartalmazó kémcsövekben lévő tenyészeteket használnak. A sejtek megfertőzése előtt a táptalajt eltávolítjuk, és minden kémcsőbe 0,1-0,2 ml tesztanyag szuszpenziót adunk, amelyet antibiotikumokkal előkezeltek a baktériumok és gombák elpusztítására. 30-60 perc után. Miután a vírus érintkezett a sejtekkel, a felesleges anyagot eltávolítjuk, a kémcsőbe hordozó tápközeget adunk, és termosztátban hagyjuk, amíg a vírusreplikáció jeleit észleljük.

A vírus fertőzött sejttenyészetekben való jelenlétének jelzője lehet:

1) specifikus sejtdegeneráció kialakulása - a vírus citopátiás hatása (CPE), amelynek három fő típusa van: kerek vagy kissejtes degeneráció; többmagvú óriássejtek kialakulása - szimplasztok; sejtproliferációs gócok kialakulása, amelyek több sejtrétegből állnak;

2) az érintett sejtek citoplazmájában és sejtmagjaiban található intracelluláris zárványok kimutatása;

3) pozitív hamagglutinációs reakció (RHA);

4) pozitív hemadszorpciós reakció (RHAds);

5) plakkképződés jelensége: a vírussal fertőzött sejtek egyrétegű rétegét vékony agarréteg borítja, semleges vörös indikátor (háttér - rózsaszín) hozzáadásával. Vírus jelenlétében a sejtek rózsaszín agar hátterén színtelen zónák („plakkok”) képződnek.

6) CPD vagy GA hiányában interferenciareakció hajtható végre: a vizsgált tenyészetet újra megfertőzik a CPD-t okozó vírussal. Pozitív esetben nem lesz CPP (az interferencia reakció pozitív). Ha nem volt vírus a vizsgálati anyagban, akkor CPE-t figyelnek meg.

Vírusok izolálása csirkeembriókban.

A virológiai vizsgálatokhoz 7-12 napos csirkeembriókat használnak.

A fertőzés előtt meghatározzák az embrió életképességét. Az ovoszkópos vizsgálat során az élő embriók mozgékonyak, az érrendszer jól látható. A légzsák határait egyszerű ceruzával jelöljük. A csirkeembriókat aszeptikus körülmények között, steril eszközökkel fertőzzük meg, miután a légtér feletti héjat jóddal és alkohollal előkezelték.

A csirkeembriók fertőzésének módjai különbözőek lehetnek: a vírus felvitele a chorion-allantois membránra, a magzatvíz és az allantois üregekbe, a tojássárgája zsákba. A fertőzési módszer megválasztása a vizsgált vírus biológiai tulajdonságaitól függ.

A vírust csirkeembrióban az embrió elpusztulása, az allantois- vagy magzatvízzel történő üvegen fellépő pozitív hemagglutinációs reakció, valamint a chorion-allantois membrán fokális elváltozásai („plakkok”) jelzik.

III. Vírusok izolálása laboratóriumi állatokban.

A laboratóriumi állatok felhasználhatók a vírusok fertőző anyagból történő izolálására, ha kényelmesebb rendszerek (sejtkultúrák vagy csirkeembriók) nem használhatók. Főleg újszülött fehér egereket, hörcsögöket, tengerimalacokat és patkánykölyköket vesznek magukhoz. Az állatok fertőzése a vírus citotropizmus elve szerint történik: a pneumotróp vírusokat intranazálisan, a neurotrop vírusokat - intracerebrálisan, a dermatotrop vírusokat - a bőrbe fecskendezik.

A vírus indikációja az állatokon észlelt betegség jeleinek megjelenésén, elhullásukon, a szövetekben és szervekben bekövetkezett patomorfológiai és patohisztológiai változásokon, valamint a szervekből származó kivonatokkal végzett pozitív hemagglotinációs reakción alapul.

Absztrakt vírusok

A vírusok nagy szerepet játszanak az emberi életben. Számos veszélyes betegség kórokozói - himlő, hepatitis, agyvelőgyulladás, rubeola, veszettség, influenza stb.

1892-ben az orosz tudós D.I. Ivanovsky leírta a dohánybetegség kórokozójának - a dohánymozaik - szokatlan tulajdonságait. Ez a kórokozó átjutott a bakteriális szűrőkön, ráadásul nem szaporodott mesterséges táptalajokon. Így az egészséges dohánynövények megfertőződhetnek egy beteg növény levének sejtmentes szűrletével.

Hány évvel később fedezték fel a ragadós száj- és körömfájás kórokozóját, amely átjutott a baktériumszűrőkön is.

1898-ban Beijerinck megalkotta az új "vírus" szót (a latin méreg szóból), hogy jelezze bizonyos szűrt növényi folyadékok fertőző természetét.

1917-ben F. d'Herrel felfedezett egy bakteriofágot – egy vírust, amely megfertőzi a baktériumokat. A vírus szerkezete azonban sokáig rejtély maradt a tudósok számára. Ezért voltak a vírusok az elsők között, amelyeket elektronmikroszkóp alatt vizsgáltak közvetlenül a harmincas években történt felfedezésük után.

A vírusok és más élőlények közötti különbségek:

1. A vírusok a legkisebb élőlények (átlagosan 50-szer kisebbek, mint a baktériumok), fénymikroszkóppal nem láthatók. 30-300 nm.

2. A vírusok nem rendelkeznek sejtszerkezettel. Ha a sejtszerkezetet az élet kötelező jelének tekintjük, akkor a vírusok nem élnek. Azonban genetikai anyaggal rendelkeznek, és képesek önszaporodásra. Feltételezések szerint a vírusok olyan genetikai anyagok, amelyek egyszer kiszabadultak a sejtből, és megtartották szaporodási képességüket, amikor visszatérnek a sejtkörnyezetbe.

3. A vírusok csak élő sejten belül képesek szaporodni, és nem önálló organizmusok.

4. A vírusok egy kis nukleinsavmolekulából (DNS vagy RNS) állnak, és fehérjehéj veszi körül őket

5. A sejtes organizmusokkal ellentétben a vírusok nem képesek önmagukban fehérjéket szintetizálni. A vírus csak a nukleinsavát juttatja be a sejtbe, ami kikapcsolja a gazda DNS-t, és parancsot ad a sejtnek, hogy szintetizálja a számára szükséges fehérjéket (a vírus új kópiáinak összeállításához és felszabadításához).

A vírusok szerkezete

Vírusrészecske, más néven virion, fehérjehéjjal körülvett nukleinsavból (DNS vagy RNS) áll. Ezt a héjat hívják kapszid. A kapszid alegységekből áll - kapszomerek. Kapszid nukleinsavval - nukleokapszid- lehet csupasz, vagy tartalmazhat további héjat ( influenza és herpeszvírusok).

A legegyszerűbb vírusok, mint például a dohánymozaikvírus, csak fehérjekapszidot tartalmaznak. A szemölcsvírus és az adenovírusok szerkezete hasonló..

A vírusrészecskék lehetnek rúd alakúak vagy fonalasak, vagy poliéder alakúak.

Vírus-sejt kölcsönhatás

1. Sejtjének felismerése a vírus által. A vírus bejutását általában megelőzi egy speciális receptorfehérjéhez való kötődése a sejtfelszínen.

2. Adszorpció – a virion kötődése a sejtfelszínhez. A kötődés speciális fehérjék segítségével történik a vírusrészecske felületén, amelyek felismerik a megfelelő receptort a sejtfelszínen. Mint egy kulcs a zárhoz.

3. Áthatolás a membránon. A membrán azon része, amelyhez a vírus hozzátapadt, a citoplazmába merül, és vakuólummá alakul, amely azután egyesülhet a sejtmaggal.

4. „Vetkőzés” – kioldás a kapszidból. Akár a sejtfelszínen, akár a kapszidnak a citoplazmában lévő sejtenzimek általi elpusztítása következtében fordul elő.

5. Vírusnukleinsav másolása (reduplikációja).

6. Vírusfehérjék szintézise.

7. Virionok összerakása a sejtmagban vagy a citoplazmában.

8. A virionok kilépése a sejtből. Egyes vírusok esetében ez „robbanással” következik be, aminek következtében a sejt integritása megbomlik és elpusztul. Más vírusok bimbózásra emlékeztető módon szabadulnak fel. Ebben az esetben a gazdasejtek hosszú ideig megőrizhetik életképességüket. A virionok különböző sebességgel szabadulnak fel a sejtből. Bizonyos típusú fertőzések esetén a virionok meglehetősen hosszú ideig a sejtben maradhatnak anélkül, hogy elpusztítanák azt.

Baktérium vírusok

Vírusok, amelyek megtámadják a baktériumokat , bakteriofágoknak vagy egyszerűen fágoknak nevezzük.

A bakteriofágok szerkezete főként a T-fág példájával vizsgálták Eccherichia coli(kolifág). A kolifág poliéder fejből és farokból áll. A fej kapszomerekből áll, és DNS-t tartalmaz. A farok összetett szerkezetű, és egy üreges rúdból, az azt körülvevő összehúzódó hüvelyből, valamint egy tüskékkel és filamentumokkal (a gazdasejt adszorpciójához szükséges) alaplemezből áll.

Bakteriofág behatolása a sejtbe

A baktériumok vastag sejtfala nem engedi be a vírust a citoplazmába, mint az állati sejtek megfertőzésekor. Ezért a bakteriofág egy üreges rudat helyez a sejtbe, és azon keresztül nyomja ki a fejben található nukleinsavat.

D. I. Ivanovsky vírusok felfedezése 1892-ben megalapozta a virológia tudományának fejlődését. Gyorsabb fejlődését elősegítette az elektronmikroszkóp feltalálása és a mikroorganizmusok sejtkultúrákban történő tenyésztésének módszerének kidolgozása.

Jelenleg a virológia gyorsan fejlődő tudomány, aminek számos oka lehet:

A vírusok vezető szerepe az emberi fertőző patológiában (példák - influenza vírus, HIV humán immunhiányos vírus, citomegalovírus és más herpeszvírusok) a specifikus kemoterápia szinte teljes hiánya miatt;

A vírusok használata számos alapvető biológia és genetika kérdés megoldására.

A vírusok (és plazmidok) alapvető tulajdonságai, amelyben különböznek az élővilág többi részétől.

1. Ultramikroszkópos méretek (nanométerben mérve). A nagy vírusok (himlővírus) elérhetik a 300 nm-t, a kicsik - 20-40 nm-t. 1mm=1000µm, 1µm=1000nm.

3. A vírusok nem képesek növekedésre és bináris hasadásra.

4. A vírusok úgy szaporodnak, hogy egy fertőzött gazdasejtben saját genomi nukleinsavuk felhasználásával szaporodnak.

6. A vírusok élőhelye az élő sejtek - baktériumok (ezek bakteriális vírusok vagy bakteriofágok), növényi, állati és emberi sejtek.

Minden vírus két minőségileg eltérő formában létezik: extracelluláris - virion és intracelluláris - vírus. A mikrokozmosz ezen képviselőinek taxonómiája a virionok - a vírusfejlődés utolsó fázisa - jellemzőire épül.

A vírusok szerkezete (morfológiája).

1. Vírus genom nukleinsavakat képeznek, amelyeket egyszálú RNS-molekulák (a legtöbb RNS-vírusban) vagy kétszálú DNS-molekulák (a legtöbb DNS-vírusban) képviselnek.

2. Capsid- fehérjehéj, amelybe a genomi nukleinsav van csomagolva. A kapszid azonos fehérje alegységekből áll - kapszomerek. A kapszomerek kapszidba kétféleképpen csomagolhatók: spirálisan (helikális vírusok) és köbösen (gömb alakú vírusok).

Spirális szimmetriával A fehérje alegységei spirálban helyezkednek el, és közöttük, szintén spirálban, a genomi nukleinsav (fonalas vírusok) rakódik ki. Köbös típusú szimmetriával A virionok poliéderek lehetnek, leggyakrabban - húsz éderek - Ikozaéderek.

3. Az egyszerűen megtervezett vírusok csak nukleokapszid, azaz a kapsziddal rendelkező genomkomplexumot „meztelennek” nevezik.

4. Más vírusoknak van egy további membránszerű héja a kapszid tetején, amelyet a vírus a gazdasejtből való kilépéskor szerez meg - szuperkapszid. Az ilyen vírusokat „dressed”-nek nevezik.

A vírusok mellett léteznek még egyszerűbben szervezett formái is, amelyek átvihetőek - plazmidok, viroidok és prionok.

A vírus és a gazdasejt kölcsönhatásának fő szakaszai

1. Az adszorpció a kölcsönhatáshoz kapcsolódó kiváltó mechanizmus különleges a vírus és a gazdaszervezet receptorai (influenza vírusban - hemagglutinin, humán immunhiányos vírusban - glikoprotein gp 120).

2. Behatolás - a szuperkapszidnak a sejtmembránnal való fúziójával vagy endocitózissal (pinocitózissal).

3. Nukleinsavak felszabadítása - a nukleokapszid „levetkőzése” és a nukleinsav aktiválása.

4. Nukleinsavak és vírusfehérjék szintézise, ​​azaz a gazdasejtrendszerek alárendelése és munkájuk a vírus szaporodásáért.

5. Virion összeállítás - a vírus nukleinsav replikált másolatainak asszociációja kapszid fehérjével.

6. A vírusrészecskék kilépése a sejtből, a burokkal rendelkező vírusok szuperkapszid megszerzése.

A vírusok és a gazdasejtek közötti interakció eredményei

1. Az abortusz folyamata- amikor a sejteket megszabadítják a vírustól:

Amikor fertőzött hibás olyan vírus, amelynek replikációja segítő vírust igényel (ún. virusoidok). Például a delta (D) hepatitis vírus csak a hepatitis B vírus, Hbs - antigén, adeno-asszociált vírus - jelenlétében tud replikálódni adenovírus jelenlétében);

Amikor egy vírus megfertőzi a rá genetikailag érzéketlen sejteket;

Amikor érzékeny sejteket nem megengedő körülmények között fertőznek meg vírussal.

2. Termelő folyamat- vírusok replikációja (termelése):

- sejtek halála (lízise).(citopátiás hatás) - intenzív szaporodás és nagyszámú vírusrészecske képződés eredménye - a magas citopatogenitású vírusok által okozott produktív folyamat jellegzetes eredménye. A sejttenyészetekre gyakorolt ​​citopátiás hatás számos vírus esetében meglehetősen felismerhető specifikus természetű;

- stabil interakció, ami nem vezet sejthalálhoz (tartós és lappangó fertőzések) - az ún sejt vírusos átalakulása.

3. Integratív folyamat- a vírusgenom integrációja a gazdasejt genomjával. Ez a stabil interakcióhoz hasonló produktív folyamat speciális változata. A vírus a gazdasejt genomjával együtt replikálódik, és hosszú ideig látens maradhat. Csak a DNS-vírusok tudnak integrálódni a gazda DNS-genomjába (a „DNS a DNS-ben” elv). A gazdasejt genomjába csak a retrovírusok képesek beépülni az RNS-vírusok, amelyek erre speciális mechanizmussal rendelkeznek. Szaporodásuk sajátossága a genomi RNS-en alapuló provírus DNS szintézise a reverz transzkriptáz enzim segítségével, majd a DNS beépülése a gazda genomjába.

A vírusok tenyésztésének alapvető módszerei

1. A laboratóriumi állatok szervezetében.

2. Csirkeembriókban.

3. Sejttenyészetekben - a fő módszer.

Sejtkultúrák típusai

1. Elsődleges (tripszinezett) tenyészetek- csirkeembrió fibroblasztok (CHF), humán fibroblasztok (CHF), különféle állatok vesesejtek stb. Az elsődleges tenyészeteket különböző szövetek sejtjeiből nyerik, leggyakrabban zúzással és tripszinezéssel, és egyszer használják fel, azaz mindig szükséges hogy rendelkezzenek a megfelelő szervekkel vagy szövetekkel .

2. Diploid sejtvonalak alkalmas ismételt diszperzióra és növekedésre, általában legfeljebb 20 passzázs (elveszítik eredeti tulajdonságaikat).

3. Összekapcsolt vonalak(heteroploid kultúrák), amelyek képesek ismételt diszperzióra és transzplantációra, azaz többszörös passzázsra, a legkényelmesebbek a virológiai munkában - például a Hela, Hep stb. tumorsejtvonalak.

Speciális tápközeg sejttenyészetekhez

Különféle összetett összetételű szintetikus virológiai tápközeget használnak, beleértve a különböző növekedési faktorok nagy készletét - 199-es táptalaj, Igla, Hanks-oldat, laktalbumin-hidrolizátum. pH-stabilizátorokat (Hepes), különféle fajok vérszérumát (a borjúmagzati szérumot tartják a leghatékonyabbnak), L-ciszteint és L-glutamint adnak a táptalajhoz.

A környezet funkcionális használatától függően előfordulhatnak magasság(magas vérszérum tartalommal) - sejtkultúrák termesztésére használják vírusminták hozzáadása előtt, ill támogató(kevesebb szérumtartalommal vagy szérum nélkül) - vírussal fertőzött sejtkultúrák fenntartásához.

Sejtkultúrák vírusfertőzésének kimutatható megnyilvánulásai

1. Citopátiás hatás.

2. A befogadó testek azonosítása.

3. Vírusok kimutatása fluoreszcens antitestekkel (MFA), elektronmikroszkóppal, autoradiográfiával.

4. Színteszt. Az optimális sejttenyésztési körülmények között (pH kb. 7,2) a fenolvöröst pH indikátorként tartalmazó táptalaj szokásos színe vörös. A sejtproliferáció megváltoztatja a pH-t és ennek megfelelően a táptalaj színét vörösről sárgára a pH savas oldalra való eltolódása miatt. Amikor a vírusok szaporodnak a sejttenyészetekben, sejtlízis megy végbe, és a táptalaj pH-ja és színe nem változik.

5. Vírusos hemagglutinin kimutatása - hemadszorpció, hemagglutináció.

6. Plakk módszer (plakkképződés). Számos vírus sejttenyészetekre gyakorolt ​​citolitikus hatása következtében tömeges sejthalál zónái képződnek. A plakkokat azonosítják - vírus „sejtnegatív” telepek.

A vírusok nómenklatúrája.

A víruscsalád neve „viridae”-ra végződik, a nemzetség - „vírus”, a fajokra általában speciális neveket használnak, például rubeola vírus, humán immunhiány vírus - HIV, 1-es típusú humán parainfluenza vírus stb.

Bakteriális vírusok (bakteriofágok)

A fágok természetes élőhelye egy baktériumsejt, így a fágok mindenhol elterjedtek (például a szennyvízben). A fágok olyan biológiai jellemzőkkel rendelkeznek, amelyek más vírusokra is jellemzőek.

A fágok morfológiailag legáltalánosabb típusát a fej jelenléte jellemzi - ikozaéder, spirális szimmetriájú folyamat (farok) (gyakran üreges rúddal és összehúzódó hüvelyrel), tüskék és folyamatok (filamentumok), azaz megjelenésében némileg spermiumra emlékeztet.

A fágok és a sejt (baktérium) kölcsönhatása szigorúan specifikus, azaz a bakteriofágok csak bizonyos fajokat, ill. fagotípusok baktériumok.

A fágok és baktériumok közötti kölcsönhatás főbb szakaszai

1. Adszorpció (specifikus receptorok kölcsönhatása).

2. A vírus DNS bejuttatása (fág injekció) úgy történik, hogy a sejtfal egy részét olyan anyagokkal lizáljuk, mint a lizozim, összehúzzuk a hüvelyt, a farokrudat a citoplazmatikus membránon keresztül a sejtbe toljuk, és DNS-t injektálunk a citoplazmába. .

3. Fág szaporodás.

4. Leánypopulációk kilépése.

A fágok alapvető tulajdonságai

Megkülönböztetni virulens fágok, képes a folyamat produktív formáját előidézni, és mérsékelt égövi fágok, reduktív fágfertőzést okozva (fágredukció). Ez utóbbi esetben a sejtben lévő fággenom nem replikálódik, hanem bekerül (integrálódik) a gazdasejt kromoszómájába (DNS a DNS-ben), a fág prófág Ezt a folyamatot ún lizogén. Ha egy fág egy baktériumsejt kromoszómájába történő bejuttatása következtében új öröklődő tulajdonságokra tesz szert, a bakteriális variabilitás ezen formáját ún. lizogén (fág) konverzió. A genomjában prófágot hordozó baktériumsejtet lizogénnek nevezzük, mivel a prófág, ha egy speciális represszor fehérje szintézise megszakad, a lítikus fejlődési ciklusba kerülhet, és a baktérium lízisével produktív fertőzést okozhat.

A mérsékelt égövi fágok fontosak a genetikai anyag baktériumok közötti cseréjében - transzdukcióban(a genetikai csere egyik formája). Például csak a diftéria kórokozója képes exotoxint termelni, amelynek kromoszómájába egy mérsékelt prófágot hordozó operon tox, amely a diftéria exotoxin szintéziséért felelős. A mérsékelt égövi fág toxin a nem toxikus diftéria bacillus lizogén átalakulását okozza toxigénné.

A baktériumokra gyakorolt ​​hatásuk spektruma szerint a fágok a következőkre oszthatók:

Többértékű (lizálja a közeli rokon baktériumokat, például a szalmonellát);

Egyértékű (egy faj lizáló baktériuma);

Típusspecifikus (csak a kórokozó bizonyos fágtermékeit lizálja).

Szilárd táptalajokon a fágokat gyakrabban mutatják ki foltteszttel (negatív folt kialakulása a telepnövekedés során) vagy agar réteg módszerrel (Gracia titrálás).

A bakteriofágok gyakorlati alkalmazása.

1. Azonosításhoz (fagotípus meghatározása).

2. Fág profilaxisra (járványok megállítása).

3. Fágterápiára (dysbacteriosis kezelésére).

4. A környezet egészségügyi állapotának felmérése és epidemiológiai elemzés.