Što utječe na virus bjesnoće. Sanitarna mikrobiologija

1. Promjenjivi, fiksni i kardinalni križevi U ovom poglavlju sakupili smo stare diktate koje je Morya pisao u pripremi za pisanje druge knjige o astrologiji. Međutim, nikada nismo uspjeli krenuti u ovaj planirani posao iz jednostavnog razloga što

MU 3.3.1.1099-02

METODIČKE UPUTE

3.3.1. PREVENCIJA CJEPIVANJEM

Sigurnost rada s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće

Datum uvođenja 2002-04-01

1. RAZVIO Ruski istraživački institut "Mikrob" Ministarstva zdravstva Ruske Federacije (doktor medicinskih znanosti I.A. Dyatlov, dr. sc. A.K. Nikiforov, dr. sc. S.A. Eremin); Državni istraživački institut za standardizaciju i kontrolu medicinskih bioloških pripravaka nazvan po V.I. L.A. Tarasevich iz Ministarstva zdravstva Ruske Federacije (doktor medicinskih znanosti A.A. Movsesyants, kandidat medicinskih znanosti I.A. Ozeretskovsky, istraživač G.B. Ageenko).

3. ODOBRENO od strane glavnog državnog sanitarnog liječnika Ruske Federacije - prvog zamjenika ministra zdravstva Ruske Federacije G.G. Onishchenko 15. siječnja 2002. Stupio na snagu 1. travnja 2002.

4. PRVI PUT PREDSTAVLJENO.

1 područje upotrebe

1 područje upotrebe

1.1. Ove smjernice su razvijene u skladu sa Saveznim zakonom "O sanitarnoj i epidemiološkoj dobrobiti stanovništva" od 30. ožujka 1999. N 52-FZ, "Propisima o državnoj sanitarnoj i epidemiološkoj regulativi" i sanitarnim pravilima "Sigurnost rada s mikroorganizmi III-IV skupina patogenosti i helminti. SP 1.2.731-99".

1.2. Zahtjevi ovih smjernica obvezni su za zdravstvena tijela i ustanove konstitutivnih entiteta Ruske Federacije.

2. Regulativne reference

Ove smjernice koriste reference na sljedeće regulatorne dokumente:

2.1. Savezni zakon "O sanitarnoj i epidemiološkoj dobrobiti stanovništva" N 52-FZ od 30. ožujka 1999.

2.2. Sanitarna pravila "Sigurnost rada s mikroorganizmima III-IV skupine patogenosti i helmintima. SP 1.2.731-99" .

2.3. Sanitarna pravila "Postupak za računovodstvo, skladištenje, prijenos i prijevoz mikroorganizama I-IV skupina patogenosti. SP 1.2.036-95" .

2.5. Sanitarna pravila za uređenje, opremu i održavanje eksperimentalnih bioloških klinika (vivarija), odobrena. Ministarstvo zdravstva SSSR-a od 6. travnja 1973. N 1045-73.

2.6. Građevinske norme i pravila "Javne zgrade i građevine". SNiP 2.08.02-89 i "Priručnik za projektiranje zdravstvenih ustanova" u 5 svezaka. - V.1, 3, 5. Gosgrazhdanstroy. - M., 1989.

2.7. OST-42-21-2-85 "Sterilizacija i dezinfekcija medicinskih proizvoda. Metode, sredstva. Načini".

2.8. Naredba "O odobrenju privremenih popisa štetnih, opasnih tvari i proizvodnih čimbenika, kao i rada, tijekom čijeg se obavljanja provode preliminarni i periodični zdravstveni pregledi", odobrena. Ministarstvo zdravstva i medicinske industrije i Državni odbor za sanitarni i epidemiološki nadzor Rusije od 05.10.95 N 280/88.

2.9. "Uputa za rad i kontrolu učinkovitosti ventilacijskih uređaja u zdravstvenim ustanovama", odobrena. Ministarstvo zdravlja SSSR-a od 20. ožujka 1975

2.11. "Smjernice za uporabu baktericidnih svjetiljki za dezinfekciju zraka i površina u prostorijama", odobreno. Ministarstvo zdravstva i medicinske industrije Rusije od 28.02.95 N 11-16 / 03-06.

2.12. „Smjernice za nadzor rada parnih i zračnih sterilizatora“, odobren. Ministarstvo zdravstva SSSR-a od 28. veljače 1991. N 15 / 6-5.

2.13. "Sigurnosni propisi, industrijska sanitarija i sanitarni i protuepidemijski režim za poduzeća za proizvodnju bakterijskih i virusnih pripravaka", odobren. Ministarstvo zdravlja SSSR-a od 30. kolovoza 1979

2.14. Metode laboratorijskog istraživanja bjesnoće. WHO. - Ženeva, 1975.

3. Pojmovi, definicije i kratice

Akcident je izvanredno stanje u kojem se stvara stvarna ili potencijalna mogućnost ispuštanja uzročnika bolesti u zrak proizvodnog prostora, okoliš ili zaraze osoblja.

Biološka sigurnost - sustav biomedicinskih, organizacijskih i inženjerskih mjera i sredstava usmjerenih na zaštitu radnog osoblja, stanovništva i okoliša od djelovanja patogenih bioloških agenasa.

Biološki sigurnosni kabinet je izvedba koja služi za fizičku izolaciju (držanje i kontrolirano uklanjanje iz radnog prostora) mikroorganizama kako bi se spriječila mogućnost zaraze osoblja i kontaminacije zraka radnog prostora i okoliša.

Boxed soba (box) - izolirana soba s predsobljem (pre-box).

Laboratorij - strukturna jedinica koja obavlja eksperimentalni i / ili / proizvodni rad s patogenim biološkim agensima.

"Zarazna" zona - prostorija ili skupina prostorija u laboratoriju u kojima se manipulira proizvodnim sojevima fiksiranog virusa bjesnoće.

"Čista" zona - prostorija ili skupina laboratorija u kojima se ne provode manipulacije s industrijskim sojevima fiksiranog virusa bjesnoće.

Proizvodni rad - rad na proizvodnji medicinskih imunobioloških pripravaka korištenjem industrijskih sojeva fiksnog virusa bjesnoće.

Fiksni virus bjesnoće* - oslabljeni soj virusa bjesnoće dobiven produljenim prolazom kroz mozak kunića. Proizvodni sojevi fiksnog virusa bjesnoće pohranjeni su u GISK-u im. L.A. Tarasevicha i izdaju se jednom godišnje ustanovama koje imaju pravo raditi s mikroorganizmima III-IV skupine patogenosti.
_______________
* Na primjer, sojevi fiksnog virusa bjesnoće "Moskva" i "CVS".


OZO - osobna zaštitna oprema.

4. Zahtjevi za organizaciju rada s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće

4.1. Opći zahtjevi

Rad s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće može se provoditi u laboratorijima koji imaju dopuštenje izdano na propisan način od strane glavnog državnog sanitarnog liječnika konstitutivnog entiteta Ruske Federacije na razdoblje od 5 godina. Postaje nevažeći ako se laboratorij premjesti ili ponovno planira, a može se i otkazati u slučaju kršenja zahtjeva biološke sigurnosti.

4.2. Zahtjevi za proizvodne sojeve fiksnog virusa bjesnoće

Stručni odbor SZO (1972.) preporučio je sljedeće zahtjeve za proizvodne sojeve fiksnog virusa bjesnoće:

- pažljivo bilježenje povijesti prolaza;

- provođenje u proizvodnji najviše 10 pasaža od posljednje kontrole njegovih bioloških svojstava;

- minimalna patogena aktivnost za laboratorijske životinje s ekstraneuralnim davanjem;

- antigenska specifičnost i imunogena aktivnost;

- proučavanje svojstava proizvodnog soja fiksnog virusa bjesnoće nakon svakih 10 pasaža.

Fiksni virus bjesnoće mora imati sljedeće glavne karakteristike:

- kratko razdoblje inkubacije (4-5 dana);

- veća patogenost za kuniće s intracerebralnom infekcijom;

- značajno slabljenje sposobnosti formiranja Negrijevih tjelešaca;

- izazvati paralitički oblik bjesnoće bez ekscitacijskih pojava;

- nakupljanje u CNS-u miševa do 6,0-7,0 IgLD/0,03 ml;

- visok afinitet za središnji živčani sustav i nizak afinitet za unutarnje organe.

4.3. Zahtjevi za prostor i opremu laboratorija

4.3.1. Laboratoriji koji rade s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće trebaju biti smješteni u zasebnoj zgradi ili izoliranom dijelu zgrade s posebnim ulazom.

4.3.2. Laboratorij mora biti opremljen vodom, kanalizacijom, električnom energijom, grijanjem i ventilacijom. Svi laboratorijski prostori moraju imati prirodno i umjetno osvjetljenje, ovisno o vrsti rada, u skladu sa zahtjevima važećih regulatornih dokumenata.

4.3.3. Prostorije laboratorija treba podijeliti na "zaraznu" i "čistu" zonu. Planske odluke i smještaj opreme trebaju osigurati tijek promocije proizvodnih sojeva fiksnog virusa bjesnoće i ispunjavanje zahtjeva ove upute.

4.3.4. Laboratorij treba imati skup radnih soba i drugih prostorija, uključujući tuš kabinu, u skladu s proizvodnim kapacitetom i nizom tehnoloških operacija koje se izvode.

4.3.5. Unutarnje uređenje prostora mora biti izvedeno u skladu s funkcionalnom svrhom. Površina poda, zidova, stropa u laboratorijskim prostorijama "zarazne" zone treba biti glatka, bez pukotina, lako se obrađuje, otporna na deterdžente i dezinficijense, podovi ne smiju biti skliski.

4.3.6. Prozori i vrata prostorija "zarazne" zone laboratorija moraju biti hermetički zatvoreni.

4.3.7. Postojeću ispušnu ventilaciju iz "zarazne" zone laboratorija treba izolirati od ostalih ventilacijskih sustava i opremiti finim filtrima za zrak. Pri korištenju biološki sigurnosnih kabineta klase II opremljenih sustavom ispušne ventilacije s finim filtrima tipa "Like", sustav ispušne ventilacije može se koristiti bez ugradnje filtara.

4.3.8. Dopuštena je ugradnja klima uređaja u radnim prostorijama i boksovima. Tijekom rada s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće, klima uređaji moraju biti isključeni.

4.3.9. Laboratorijski namještaj u "zaraznom" području treba imati premaz koji je otporan na deterdžente i dezinficijense. Površina stolova ne smije imati šavove i pukotine.

4.3.10. Širina prolaza do radnih mjesta ili između dva reda izbočene opreme mora biti najmanje 1,5 m (uključujući izbočene konstrukcije).

4.3.11. Prostorije u kojima se obavlja rad s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće moraju biti opremljene baktericidnim svjetiljkama prema "Uputama za uporabu baktericidnih svjetiljki za dezinfekciju zraka i površina u zatvorenim prostorima". Svjetiljke se uključuju nakon mokrog čišćenja. Ulaz u prostorije dopušten je samo nakon provjetravanja od najmanje 30 minuta (kod korištenja bezozona baktericidnih lampi provjetravanje nije potrebno). O vremenu rada svake svjetiljke potrebno je voditi evidenciju s napomenom u dnevniku.

4.3.12. Kod orijentacije prozora prema jugu, potrebno je osigurati zaštitu radnih površina od izravne sunčeve svjetlosti pomoću folija za zaštitu od svjetla, roleta od materijala otpornog na dezinficijense.

4.3.13. Prostorije laboratorija moraju biti nepropustne za glodavce i insekte.

4.3.14. Laboratorij mora biti opremljen opremom za gašenje požara.

4.4. Zahtjevi za rad u laboratoriju

4.4.1. Rad s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće obavljaju stručnjaci s višom i srednjom stručnom spremom koji su prošli posebnu obuku.

4.4.2. Osoblju je dopušteno raditi s proizvodnim sojevima fiksnog virusa bjesnoće nakon što su bili upoznati s usklađenošću sa zahtjevima biološke sigurnosti. Naknadni brifinzi se provode najmanje jednom godišnje, uz upis u odgovarajuće dnevnike.

4.4.3. Instrumenti, oprema i mjerni instrumenti koji se koriste u radu laboratorija moraju biti atestirani, tehnički ispravni, podlijegati pravovremenom mjeriteljskom nadzoru i imati tehničku putovnicu. Za svaki uređaj (instalaciju) treba razviti pravila (upute) za njihov rad, uzimajući u obzir zahtjeve biološke sigurnosti.

4.4.4. U laboratoriju se moraju koristiti odobrena dezinficijensa (3% kloramin). Rok trajanja gotove otopine ne smije biti duži od 15 dana.

4.4.5. U prostorijama "zarazne" zone laboratorija obavljaju se:

- rad sa životinjama (infekcija, obdukcija);

- održavanje zaraženih životinja;

- dezintegracija, homogenizacija moždanog tkiva i druge operacije s vjerojatnim stvaranjem aerosola;

- infekcija stanične kulture;

- pripremanje suspenzija i suspenzija;

- rad s liofiliziranim proizvodnim sojevima fiksnog virusa bjesnoće.

4.4.6. Za vrijeme rada vrata radnih prostorija moraju biti zatvorena. Prije rada uključuje se ventilacija "na odljevu". Zabranjen je izlazak iz radne prostorije za vrijeme rada.

4.4.7. Infekciju životinja provode najmanje dva djelatnika.

4.4.8. Prilikom pipetiranja koristite gumene žarulje ili automatske uređaje.

4.4.9. Prije upotrebe pribor, pipete, oprema, štrcaljke itd. mora se provjeriti cjelovitost i upotrebljivost.

4.4.10. Ampule s liofiliziranim industrijskim sojevima fiksiranog virusa bjesnoće otvaraju se sterilno preko pladnja ili pladnja s gazom namočenom u otopinu za dezinfekciju. Gornji kraj ampule se zagrije na plamenu plamenika, ukloni parafin, zatim se komadićem sterilne vate namočenom u sterilnu vodu nježno prisloni razvučeni kraj ampule da se napravi pukotina. Istom mokrom vatom kruži se oko grlića ampule. Nakon što nastane kružna (ili ne potpuno kružna) pukotina, kraj ampule se prekrije gazom ili vatom i odlomi pincetom.

4.4.11. Nakon otvaranja ampule u nju se doda 1,0 ml sterilne destilirane vode i lagano protrese. Dobivena suspenzija koja sadrži fiksirani virus bjesnoće koristi se za zarazu laboratorijskih životinja.

4.4.12. Za intracerebralnu infekciju kunić se sigurno fiksira na posebnom stroju ili se daje laka anestezija (2-2,5 ml Rometar otopine intramuskularno 20-30 minuta prije infekcije). Potom se dlake na području predviđene injekcije pažljivo izrezuju, tretiraju 70% otopinom etanola i 5% otopinom joda te sterilnom štrcaljkom kapaciteta 2 ml i iglom vel. N 20: (10x0,90), injicira se 0,25 ml suspenzije fiksiranog virusa soja bjesnoće. Punkcija se vrši otprilike na sredini linije koja uvjetno povezuje vanjski kut oka i uha. Kod zaraze velikih kunića može se koristiti šilo ili troakar od nehrđajućeg čelika. Očigledni znaci paralize pojavljuju se kod kunića 4. dan nakon inokulacije; u rijetkim slučajevima, razvijaju se do 7 dana. Ekstrakcija mozga provodi se kod životinje tek nakon razvoja potpune slike paralize, karakteristične za fiksni virus bjesnoće. Među prvim simptomima eksperimentalne bjesnoće su vrućica, sramežljivost i proširene zjenice. Zatim se javljaju meningealni fenomeni, pareza, obično počevši od stražnjih udova, brzo napredujuća paraliza, zahvaća sve udove, cervikalne i zatiljne mišiće.

4.4.13. Bolesni kunići sa slikom potpune paralize, ali koji još dišu, kolju se potpunim iskrvavivanjem. Mozak se koristi za stvaranje antigena bjesnoće. Nakon dekapitacije, koža se uklanja, kralježnica se odvaja zajedno s leđnom moždinom, koji se podvrgavaju autoklaviranju (2,0 kgf/cm (0,2 MPa). 132 ± 2 °C), kao infektivni materijal.

4.4.14. Da bi se izvadio mozak, životinja se stavlja na pliticu s trbuhom prema dolje tako da je glava na rubu stola. Uz pomoć pincete, skalpela i škara glava se odvaja od tijela. Zatim se skalpira tjeme, uklanjaju se uši i gornji kapci. Ogoljena površina lubanje se navlaži 70% alkoholom i stavi u kristalizator. Kristalizator se prenosi u sterilnu kutiju za pripremu antigena. Prije otvaranja lubanje se dva puta tretira sa 70% etilnim alkoholom. Zatim se lubanja kunića fiksira u posebnoj napravi (Dodatak 1), koja osigurava sigurno pričvršćivanje glave životinje. Držeći rezni nož u lijevoj ruci, desnom rukom čekićem otvara se lubanja s četiri pravokutna reza. Najprije treba napraviti rez duž linije koja povezuje sredinu očiju, zatim rez u parijetalnoj regiji, a zatim ta dva reza spojiti okomitim rezovima. Zatim, odloživši rezni nož i čekić, dura mater se oslobađa pincetom i škarama i prednji dio mozga se odvaja na razini olfaktornog režnja; prijeći medulu oblongatu iza malog mozga, podići mozak, prijeći optičku kijazmu i zatim ga prenijeti u sterilnu Petrijevu zdjelicu za vaganje.

4.4.15. Za pripremu antigena, mozak se nakon vaganja stavi u sterilnu tarionicu ili homogenizator i zdrobi. Destilirana voda koja sadrži 0,5% fenola dodaje se smrvljenom mozgu da se dobije 10% suspenzija mozga. Suspenzija mozga se filtrira kroz trostruki sloj gaze. Sterilnost suspenzije mozga provjerava se inokulacijom na šećernu juhu, mesno-peptonski bujon i mesno-peptonski bujon s 0,1% agara i komadiće mesa. Usjevi se drže na 37 °C 5 dana. Za imunizaciju proizvodnih konja dopušteno je koristiti sterilni antigen koji je čuvan na temperaturi od 4 °C najviše 14 dana.

4.4.16. Za pripremu početnih kultura fiksnog virusa bjesnoće, zečji mozak se stavi u sterilnu tarionicu ili homogenizator i zdrobi. Usitnjenom mozgu dodaje se destilirana voda dok se ne dobije 10%-tna suspenzija mozga. Sterilnost suspenzije mozga provjerava se inokulacijom na šećernu juhu, mesno-peptonski bujon i mesno-peptonski bujon s 0,1% agara i komadiće mesa. Suspenzija mozga se sterilno izlije u alikvote od 4-5 ml i zamrzne na temperaturi ne višoj od minus 18 °C. Optimalna temperatura za skladištenje fiksiranih sojeva virusa bjesnoće je minus 70 °C. Za infekciju, jedan alikvot se izvadi iz zamrzivača i stavi u hladnjak na 4 °C 18-20 sati. Nakon odmrzavanja, srednja faza suspenzije mozga koja sadrži maksimalnu količinu virusa pažljivo se odabere Pasteur-ovom pipetom.

4.4.18. Pravila autopsije miševa. Miševi se u stanju teških terminalnih simptoma bjesnoće kolju kloroformom. Leš miša pričvršćen je na dasku leđima prema gore. Za to su potrebne dvije igle - jedna je pričvršćena za podnožje repa, a druga je vrh njuške. Za fiksiranje prednjih šapa i repa možete koristiti tri igle. Nakon tretiranja alkoholom, koža glave i vrata se secira škarama i pincetom, pri čemu se otkriva lubanja. Lubanja je stegnuta u očnim dupljama kirurškom pincetom, poklopac lubanje je odvojen zakrivljenim škarama, otkrivajući mozak. Koristeći iste zakrivljene škare, mozak se uklanja i prenosi u sterilnu Petrijevu zdjelicu, koja je prethodno izvagana. Vagaju se Petrijeve zdjelice s tkivom mozga. Zatim se mozak premjesti u sterilnu tarionicu, gdje se uz pomoć sterilnog tučka uz dodatak destilirane vode pripremi 10%-tna suspenzija mozga. Suspenzija se izlije u alikvote i čuva na temperaturi ne nižoj od minus 18 ° C. Optimalna temperatura za čuvanje sojeva fiksnog virusa bjesnoće je minus 70 ° C.

4.4.19. Po završetku radova sve predmete s industrijskim sojevima virusa bjesnoće potrebno je skloniti u skladišta (hladnjaci, termostati, ormari i sl.); obavezna je dezinfekcija radnih površina stolova 3% otopinom kloramina.

4.4.20. Iskorištene pipete potpuno (vertikalno) urone u otopinu dezinficijensa (3% kloramina), izbjegavajući stvaranje mjehurića zraka u kanalima. Trajanje dezinfekcije 60 min.

4.4.21. Korišteno posuđe, kruti otpad iz "zaraznog" područja laboratorija treba skupiti u zapečaćene spremnike i prenijeti u autoklav ili dezinficirati na licu mjesta. Zabranjeno je ispuštanje nedezinficiranih tekućina u kanalizacijsku mrežu.

4.4.22. Prijenos proizvodnih sojeva fiksnog virusa bjesnoće i korištenog posuđa za dezinfekciju treba provoditi u zatvorenim spremnicima koji isključuju infekciju osoblja tijekom prijevoza. Nakon završetka rada, prostor "zarazne" zone laboratorija se zaključava i pečati. Pečaćenje i skidanje plombi provode djelatnici laboratorija koji imaju dopuštenje voditelja laboratorija (pododjela).

4.4.23. Imunizacija proizvodnih konja provodi se prema pravilniku za proizvodnju "Tekućeg antirabičnog imunoglobulina iz krvnog seruma konja".

4.4.24. Pravila za uvođenje antigena. Uvođenje konjskog antigena provodi se u posebno opremljenoj sobi (operacijska sala). Osoblje koje ubrizgava antigen nosi odijela tipa 3 protiv kuge s gumenim rukavicama. Za primjenu antigena koristi se uređaj za masovnu inokulaciju PMP-1 koji je preko silikonskog crijeva spojen na iglu i bočicu s antigenom. Cijeli sustav ubrizgavanja je hermetički zatvoren. Mjesto ubrizgavanja antigena prethodno se tretira sa 70% otopinom alkohola. Igla se uvodi supkutano i antigen se polako ubrizgava pod blagim pritiskom. Nakon injekcije ventilom se blokira dovod antigena, koža na mjestu injekcije se steže hemostatskom pincetom 1 minutu. Pinceta se ukloni, mjesto ubrizgavanja tretira se tamponom navlaženim 70%-tnom otopinom alkohola, a tampon se nanese kolodijem ili furaplastom s perklorovinilom. Nakon upotrebe, cijeli injekcijski sustav se kuha 30 minuta u 2% otopini sode. U procesu hiperimunizacije stalno se prati opće stanje i temperaturni odgovor proizvođača. U slučaju povećanja temperature, sljedeća injekcija antigena provodi se nakon što se smanji na normu.

4.4.25. Skladištenje industrijskih sojeva fiksnog virusa bjesnoće provodi se u prostorijama zarazne zone. Skladištenje, računovodstvo, prijenos, prijevoz i uništavanje proizvodnih sojeva fiksnog virusa bjesnoće provode se u skladu sa zahtjevima SP 1.2.036-95.

4.4.26. Prijem posjetitelja dopušten je samo u posebno određenim prostorima u "čistom" području laboratorija.

4.4.27. Uklanjanje iz laboratorija opreme, laboratorijskog ili kućanskog stakla, alata i sl. provodi se samo nakon njihove dezinfekcije i uz dopuštenje voditelja.

4.4.28. U "zaraznoj" zoni laboratorija zabranjeno je:

- ostaviti nakon završetka rada na radnom mjestu posuđe s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće "Moskva" i "CVS";

- pipetiranje ustima, prelijevanje tekućeg zaraznog materijala preko ruba posude (epruvete, tikvice, bočice);

- skladištiti vanjsku odjeću, šešire, cipele, kišobrane, torbe za kupovinu, kozmetiku itd., kao i hranu;

- pušiti, piti vodu;

- ostaviti radno mjesto bez nadzora pri obavljanju bilo kakvih poslova s ​​industrijskim sojevima virusa bjesnoće;

- tekući otpad (zaražene tekućine, ispitni materijal i sl.) izliti u kanalizaciju bez prethodne dezinfekcije.

4.4.29. U istoj prostoriji dopušteno je obavljati pokusne i proizvodne radove s industrijskim sojevima fiksiranog virusa bjesnoće. Eksperimentalni i proizvodni rad trebaju biti vremenski razmaknuti. Pokusni materijal treba čuvati odvojeno od proizvodnog materijala u hladnjaku ili termostatu posebno namijenjenom za to.

4.4.30. Svi zaposlenici koji rade s industrijskim sojevima virusa bjesnoće moraju biti pod dispanzerskim nadzorom. Periodični medicinski pregledi provode se u skladu s važećim naredbama (N 280/88 - Ministarstvo zdravstva i medicinske industrije i Državni odbor za sanitarni i epidemiološki nadzor Rusije).

4.5. Zahtjevi za korištenje osobne zaštitne opreme (PPE)

4.5.1. Osoblje laboratorija mora imati medicinske ogrtače, pidžame (kombinezone), kape, cipele na izmjenjivanje i drugu osobnu zaštitnu opremu, ovisno o vrsti posla koji obavljaju iu skladu s važećim standardima.

4.5.2. Radna odjeća i obuća mora biti individualna, odgovarati veličini radnika i čuvati se odvojeno od osobne odjeće.

4.5.3. Prilikom provođenja istraživanja u zatvorenim sobama, medicinski ogrtač se mijenja u anti-kužni ili kirurški, koji seže do donje trećine potkoljenice. Dodatno se koriste gumene rukavice, papuče i po potrebi respiratori (maske). Operacije koje zahtijevaju otvaranje lubanje i kralježnice moraju se izvoditi u gumenim rukavicama, zaštitnim naočalama i antikužnim ogrtačima. Također je potrebno nositi gumene ili izdržljive polietilenske pregače koje je lako dezinficirati ili uništiti.

4.5.4. Radnu odjeću treba mijenjati kako se zaprlja, a najmanje jednom tjedno.

4.5.5. Zaštitnu odjeću treba dekontaminirati namakanjem u 1% otopini kloramina prije pranja.

4.6. Zahtjevi za dezinfekciju materijala i čišćenje prostorija

4.6.1. Dezinfekcija raznih predmeta pri radu s industrijskim sojevima fiksnog virusa bjesnoće provodi se u skladu s prirodom predmeta koji se dezinficira.

Stol

Bjesnoća(lat. Rabies, Lyssa, Hydrophobia) od davnina je poznata kao bolest divljih i domaćih životinja. Virus bjesnoće selektivno zahvaća stanice središnjeg živčanog sustava, pa je bolest popraćena uzbuđenjem, grčevima, a potom nastupa paraliza.

Morfologija i biološka svojstva. Virus bjesnoće je štapićastog oblika, veličine 100-150 nm, prekriven ljuskom. U citoplazmi zahvaćenih stanica stvara inkluzije, koje je 1892. opisao Babesh, a 1903. Negri. Zovu se Babesh-Negrijeva tijela. Oblik inkluzija je sferičan, veličine 1-20 µm, prema Romanovskom obojeni su crvenom bojom. Njihovo otkrivanje u stanicama amonovog roga ima dijagnostičku vrijednost.

Virus se uzgaja u moždanom tkivu mišjeg embrija, kada je zaražen u žumanjčanoj vrećici ili mozgu kokošjih embrija, a također i u tijelu kunića.

Postoje dvije vrste virusa bjesnoće: ulični virus koji se izolira od bolesnih ljudi i životinja, te fiksni virus koji je Pasteur dobio tijekom dugog prolaska uličnog virusa kroz mozak zeca (fiks virus). Fix virus uzrokuje paralizu kada je zaražen kunićima kroz strogo fiksno, skraćeno razdoblje inkubacije od 3-7 dana. Nepatogen je za ljude, pse i druge životinje, ne izlučuje se slinom životinja i ljudi, rijetko se nalazi u perifernim živcima i ne tvori Babes-Negrijeva tjelešca. U proizvodnji cjepiva protiv bjesnoće koristi se fiksirani virus koji je izgubio virulentnost za ljudske životinje. U mehanizmu imuniteta koji nastaje nakon uvođenja cjepiva protiv bjesnoće najveći značaj ima fenomen interferencije virusa. Bit ovog fenomena leži u sposobnosti jednog tipa virusa koji je napao stanicu domaćina da odgodi razmnožavanje drugog tipa virusa koji je kasnije ušao u istu stanicu. Fiksni virus, koji ima veliki afinitet za živčano tkivo, u njemu se brzo razmnožava i sprječava razvoj uličnog virusa.

Održivost. Virus bjesnoće nije stabilan u vanjskom okruženju: brzo umire kada se zagrije, pod djelovanjem sunčeve svjetlosti i dezinficijensa (formalin, fenol, sublimat). U 50% glicerinu može se čuvati na -20-40°C nekoliko godina.

Patogenost. Na virus ulične bjesnoće osjetljive su sve toplokrvne divlje i domaće životinje, au manjoj mjeri i ptice. Paralitički oblici bjesnoće javljaju se u laboratorijskih životinja (zečevi, bijeli miševi, zamorci) različitim putovima infekcije.

Patogeneza i klinika. Virus bjesnoće ulazi u ljudsko tijelo sa slinom ugriza bijesnih životinja ili sa slinom ljudske kože bolesnih životinja. Preko debla perifernih živaca virus dospijeva u središnji živčani sustav i inficira ga. Razdoblje inkubacije za bjesnoću često traje od 1 do 3 mjeseca i ovisi o mjestu ugriza. Kod ugriza lica i vrata razdoblje je kraće (od 10 dana do godinu dana). Bolest počinje pojavom boli na mjestu ugriza, osjećajem straha, tjeskobe, razdražljivosti. Pri pokušaju točenja, pa čak i pri pogledu na vodu, javljaju se grčevi mišića pri gutanju, pa se bolest bjesnoće naziva bjesnoća ili hidrofobija. Pacijent je uznemiren, svijest je poremećena, opažaju se konvulzivni napadaji. Pacijenti mogu ugristi, požuriti medicinskom osoblju. Nakon nekoliko dana dolazi do paralize mišića udova, lica, dišnih mišića i smrti. Trajanje bolesti je 6-7 dana.

Virološka dijagnoza. Nisu razvijene metode in vivo indikacije virusa bjesnoće. Dijagnoza se postavlja na temelju tipične kliničke slike bolesti. Nakon smrti, Babesh-Negrijeva tijela nalaze se u zahvaćenim moždanim stanicama. Specifični antigen može se otkriti i metodom fluorescentnih protutijela. Virus se može izolirati inficiranjem laboratorijskih životinja: kunića, bijelih miševa i zamoraca, pri čijem otvaranju se u stanicama zahvaćenog mozga nalaze Babesh-Negrijeve inkluzije.

Prevencija i liječenje. U svrhu specifične profilakse primjenjuje se cjepivo protiv bjesnoće koje je prvi predložio Pasteur. Cjepiva se pripremaju iz suspenzije moždanog tkiva kunića, ovaca ili bijelih štakora koji sisaju zaraženih fiksiranim virusom bjesnoće. Postoje različite vrste cjepiva, koje se razlikuju po količini i kvaliteti konzervansa. Cjepivo Fermi sadrži 1% fenola, cjepivo Semple sadrži 0,25% fenola, a cjepivo Phillips sadrži glicerin. Posljednjih godina predloženo je živo cjepivo protiv bjesnoće od virusa koji se uzgaja na ptičjim embrijima (Fleuryjevo cjepivo). Djelovanje cjepiva temelji se na fenomenu interferencije virusa. Cijepljenju podliježu sve osobe koje su ugrizle ili polizale bolesne ili sumnjive životinje na bjesnoću. Ne postoje kontraindikacije za primjenu cjepiva jer je to jedini način da se zaraženi spase. Obično se cijepljenja ponavljaju 12-30 dana ili više, ovisno o težini ugriza, njegovom mjestu i vremenu proteklom od ugriza. Cjepivo se ubrizgava supkutano u abdomen.

Cijepljenje treba započeti što je prije moguće nakon ugriza i provoditi prema postojećim uputama. Imunitet koji se javlja nakon cijepljenja traje do 6 mjeseci. Ne cijepe se osobe kod kojih se pojave znakovi bolesti. Kod teških ugriza u glavu i vrat, istodobno s cjepivom protiv bjesnoće daje se gamaglobulin ili serum protiv bjesnoće. Sumnjive životinje promatraju se 7 dana i ako se ne uoče znakovi bolesti, smatraju se zdravima. Ne postoje učinkoviti tretmani za bjesnoću.